丹參多酚酸鹽體外抗腫瘤作用的實驗研究.pdf

1、研究背景及目的：從中醫(yī)藥中開發(fā)研制新的抗腫瘤有效成分是當前癌癥治療的熱點課題。傳統(tǒng)中藥丹參具有活血化瘀功效，臨床廣泛用于心腦血管疾病。大量研究結果表明，丹參具有抗腫瘤作用，但對于丹參抗腫瘤的研究主要集中在脂溶性成分方面。本課題采用丹參的水溶性活性成分丹參多酚酸鹽為原料，首次研究了其體外抗腫瘤的作用，探討其可能機制，為今后應用于臨床治療腫瘤提供了一定的依據(jù)。 方法：1. 采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法測定丹參多酚酸鹽體外對人肝癌細

2、胞株SMMC-7721細胞、人肺腺癌細胞株SPC-A-1細胞、B淋巴瘤細胞株Raji細胞、急性粒細胞白血病細胞株HL-60細胞四種人體腫瘤細胞株增殖的影響，繪制細胞生長曲線； 2. 通過倒置顯微鏡、吉姆薩(Giemsa)染色、吖啶橙(AO)熒光染色和透射電鏡觀察SMMC-7721細胞形態(tài)學及超微結構的變化； 3. 流式細胞儀檢測細胞周期的改變及細胞凋亡情況； 4. 基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測凋亡梯狀條帶；

3、 5. 應用蛋白免疫印跡(Western Blot)技術檢測凋亡有關的基因P53和Bcl-2的蛋白表達水平。 結果：1. 丹參多酚酸鹽在一定濃度范圍內(nèi)(0.2mg/ml~1 mg/ml)對SPC-A-1、SMMC-7721、Raji、HL-60等細胞株的增殖都有明顯的抑制作用，且呈時間和劑量依賴關系； 2. 光鏡下可見丹參多酚酸鹽處理后SMMC-7721細胞體積變小，核固縮、深染、邊集，晚期細胞核破裂等凋亡形態(tài)，隨藥

4、物濃度增加細胞形態(tài)學改變越明顯，電鏡下可見細胞內(nèi)超微結構的變化，如胞質(zhì)內(nèi)空泡增多，核染色質(zhì)凝聚和邊集，及有膜包裹的凋亡小體出現(xiàn)； 3. 0.4mg/ml丹參多酚酸鹽作用于SMMC-7721細胞不同時間后，碘化丙啶(PI)單染流式細胞儀分析，G0/G1期出現(xiàn)“凋亡峰”，S期細胞比例明顯增加；不同濃度丹參多酚酸鹽作用于SMMC-7721細胞48小時后，Annexin V-FITC/PI雙染結果丹參多酚酸鹽誘導細胞的凋亡率遠大于壞死率

5、，且作用呈濃度依賴性，提示丹參多酚酸鹽可將SMMC-7721細胞阻滯于S期繼而發(fā)生細胞凋亡； 4. 不同濃度丹參多酚酸鹽作用于SMMC-7721細胞48小時后，DNA瓊脂糖凝膠電泳結果顯示藥物組有梯形凋亡條帶(DNA ladder)，而陰性對照組未見此現(xiàn)象； 5. 不同濃度丹參多酚酸鹽作用SMMC-7721細胞48小時，Western Blot檢測顯示低、中濃度藥物組細胞的P53蛋白表達水平有明顯升高，而高濃度藥物組的P