新型萘酰亞胺類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡作用.pdf

1、萘酰亞胺類DNA嵌入劑作為抗癌試劑已經(jīng)取得了巨大的進(jìn)展，如氨萘非特（amonafide）和米托萘胺（mitonafide）已經(jīng)進(jìn)入到了Ⅱ期臨床實(shí)驗(yàn)。但是這類化合物存在著諸多不足，如具有神經(jīng)毒性，腫瘤特異性差等。由于此類化合物以DNA為作用靶點(diǎn)，因此應(yīng)該設(shè)法提高它對(duì)DNA的結(jié)合能力，以提高其細(xì)胞毒作用和抗腫瘤活性。 大連理工大學(xué)精細(xì)化工國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室采用烷基異硫脲陽(yáng)離子作為連接基對(duì)稱性地連接兩個(gè)萘酰亞胺形成DNA雙嵌入劑，利用烷基

2、異硫脲陽(yáng)離子與萘酰亞胺母體環(huán)的協(xié)同效應(yīng)，設(shè)計(jì)合成了dNIT系列和sNIT系列新型萘酰亞胺類化合物，使其具有更強(qiáng)的DNA結(jié)合能力。 本研究首先以宮頸癌Hela細(xì)胞，人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，人肝癌SMMC—7721細(xì)胞和人乳腺癌MCF—7細(xì)胞四種腫瘤細(xì)胞系為體外模型，通過(guò)MTT法檢測(cè)了dNIT系列和sNIT系列化合物的細(xì)胞毒性。結(jié)果顯示，雙萘酰亞胺類化合物比單萘酰亞胺類化合物具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性，而細(xì)胞毒性強(qiáng)弱與連接臂長(zhǎng)度無(wú)相關(guān)性。

3、IC50結(jié)果顯示，dNIT系列對(duì)不同組織的腫瘤細(xì)胞具有特異性，但這種特異性也與連接臂長(zhǎng)度無(wú)關(guān)。其中，dNIT—6對(duì)MCF—7細(xì)胞作用12、18和24h的IC50值分別為9.93±1.03、8.72±1.22和6.92±1.56μmol/L，dNIT—2對(duì)SMMC—7721細(xì)胞作用12、18和24h的IC50值分別為12.76±1.19、10.16±1.31和7.75±1.43μmol/L，IC50值較小，特異性較強(qiáng)，因此選擇dNIT—6

4、和dNIT—2討誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用通路。 dNIT—6作用于人乳腺癌MCF—7細(xì)胞12h，通過(guò)顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)，PI單染檢測(cè)細(xì)胞周期分布，AV/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P53和Bcl—2蛋白活性，分光光度法檢測(cè)caspase—9和caspase—3活性。結(jié)果表明，dNIT—6以濃度依賴性方式誘導(dǎo)MCF—7細(xì)胞凋亡，并造成細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期。dNIT—6能夠激活P53，抑制Bcl—2，進(jìn)而激活caspa

5、se—9、caspase—3，引發(fā)凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。 dNIT—2作用于人肝癌SMMC—7721細(xì)胞12h，通過(guò)顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)，PI單染檢測(cè)細(xì)胞周期分布，AV/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P53和Bcl—2蛋白活性，羅丹明123染色檢測(cè)線粒體膜電位變化，分光光度法檢測(cè)caspase—9和caspase—3活性。結(jié)果表明，dNIT—2以濃度依賴性方式誘導(dǎo)SMMC—7721細(xì)胞凋亡，并造成細(xì)胞周期阻滯于S

6、期。dNIT—2能夠激活了P53，破壞線粒體膜電位，抑制Bcl—2，進(jìn)而激活caspase—9、caspase—3，引發(fā)凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞經(jīng)由線粒體途徑凋亡。 研究結(jié)果表明，dNIT—6和dNIT—2對(duì)腫瘤細(xì)胞具有很強(qiáng)的毒性作用，它們對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用都與P53激活和Bcl—2抑制有關(guān)，但是對(duì)于不同腫瘤細(xì)胞，它們引起凋亡的機(jī)制不完全相同，這與所研究的細(xì)胞株不同有直接關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)為深入了解萘酰亞胺類的毒性作用機(jī)理打下