結(jié)外鼻型NK-T細(xì)胞淋巴瘤UBE1和p27表達(dá)與EB病毒感染關(guān)系研究.pdf

1、本研究分為四個部分：一、ENKL UBE1和p27蛋白表達(dá)及與EBV感染關(guān)系研究收集ENKL和同期鼻咽粘膜良性淋巴組織增生(BLP)標(biāo)本各48例，用免疫組化方法檢測UBEl和p27蛋白表達(dá)情況，原位雜交法檢測EBERs表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)88％ENKL表達(dá)UBE1，其中67％為強(qiáng)陽性，21％為弱陽性，12％為陰性表達(dá)；38％BLP表達(dá)UBE1，陽性細(xì)胞主要為淋巴濾泡生發(fā)中心細(xì)胞及少數(shù)濾泡間轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞，其中23％為強(qiáng)陽性表達(dá)，15％為弱陽性

2、表達(dá)，62％為陰性表達(dá)，陰性表達(dá)的病例生發(fā)中心內(nèi)見散在分布的UBE1陽性細(xì)胞，但陽性細(xì)胞數(shù)不到10％。48例BLP p27蛋白均呈陽性表達(dá)，陽性細(xì)胞分布在淋巴濾泡間細(xì)胞、套細(xì)胞和少數(shù)濾泡生發(fā)中心細(xì)胞；而大部分濾泡中心細(xì)胞和中心母細(xì)胞p27表達(dá)低下； 27％ENKL表達(dá)p27，其中12％強(qiáng)陽性，2例同時伴胞質(zhì)陽性，15％弱陽性，73％陰性。p27表達(dá)組預(yù)后較陰性組的好。90％ENKL表達(dá)EBERs，19％BLP可見少數(shù)EBERs陽性細(xì)胞，

3、但陽性細(xì)胞數(shù)均不到1％。ENKL UBE1表達(dá)與EBV感染狀況呈顯著正相關(guān)性(r=0.386，P=0.007)，與p27表達(dá)呈負(fù)相關(guān)而無統(tǒng)計學(xué)意義(r=．0.143，P=0.33)；p27表達(dá)與EBV感染狀況呈負(fù)相關(guān)但無統(tǒng)計學(xué)意義(r=．0.099，P：0.503)。 二、用RNAi方法下調(diào)EBNAl表達(dá)對EBV陽性HANK1細(xì)胞UBE1、p27基因表達(dá)的影響EBV核抗原1(EBNA1)表達(dá)于所有EBV相關(guān)性惡性腫瘤細(xì)胞中，EB

4、NA1對EBV潛伏感染基因組的復(fù)制，轉(zhuǎn)錄和附加體的維持至關(guān)重要，抑制EBNA1表達(dá)可抑制EBV復(fù)制。HANK1細(xì)胞株是日本Kagami等建立的NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株。表達(dá)Ⅱ型EBV潛伏感染相關(guān)基因：EBERs，EBNA1和LMP1等。本研究用RNAi(RNA interference)方法抑制HANK1細(xì)胞EBNA1表達(dá)，實時定量RT-PCR和Western blot檢測相關(guān)基因表達(dá)情況，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布和凋亡。 三

5、、下調(diào)UBE1表達(dá)對HANK1細(xì)胞p27、EBNA1表達(dá)的影響設(shè)計并合成針對UBE1 mRNA序列的siRNA(small interference RNA)雙鏈分子，瞬時抑制HANK1細(xì)胞UBE1基因表達(dá)，實時定量RT-PCR和Western blot 檢測相關(guān)基因表達(dá)，MTT法檢測細(xì)胞增殖。 四、蛋白酶體抑制劑對HANKl細(xì)胞UBE1、p27基因表達(dá)的影響。 用蛋白酶體抑制劑MG132處理細(xì)胞，MTT法檢測細(xì)胞增殖，

6、實時定量RT-PCR和Western blot檢測相關(guān)基因表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布和凋亡。 結(jié)論：(1)大部分ENKLUBE1高表達(dá)，p27蛋白低表達(dá)并與EBV感染有關(guān)；(2)部分EBV相關(guān)性ENKL p27蛋白低表達(dá)原因之一是由于EBV感染使UPS亢進(jìn)加速其降解所致；(3)用EBNA1-shRNA抑制HANK1細(xì)胞EBNA1表達(dá)可下調(diào)UBEl基因表達(dá)，上調(diào)p27蛋白表達(dá)，細(xì)胞周期停滯，細(xì)胞生長受抑；EBNA1-shRN