DENV2感染的埃及伊蚊唾液腺差異蛋白質組學研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、【目的】構建埃及伊蚊（Aedes aegypti）雌蚊感染登革Ⅱ型病毒（dengue virus typeⅡ，DENV2）前后唾液腺（salivary gland，SG）差異蛋白質組圖譜，篩選與DENV2感染相關的唾液腺蛋白。
　　【方法】采用細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng)白紋伊蚊C6/36細胞以增殖DENV2，采用PCR技術和免疫熒光技術證實DENV2的感染，以TCID50法檢測感染細胞的登革病毒滴度；采用胸腔微注射法將一定滴度的病毒注射入5

2、日齡埃及伊蚊雌蚊（生理鹽水為對照組）。14日后，解剖蚊唾液腺，采用同位素標記相對和絕對定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ）技術聯(lián)合二維液相色譜串聯(lián)質譜技術，構建DENV2感染的埃及伊蚊唾液腺差異蛋白組圖譜，并對鑒定的差異蛋白質進行生物信息學分析。
　　【結果】
　　1、DENV2在C6/36細胞增殖成功，TCID50為10-6；
　

3、　2、DENV2成功感染埃及伊蚊雌蚊唾液腺；
　　3、質譜分析結果顯示共鑒定到埃及伊蚊唾液腺蛋白1350個蛋白質，其中有定量信息的有1330個。以差異表達上調≥1.2倍、差異表達下調≤0.8倍為標準，共篩選出9個差異表達蛋白，其中2個表達下調蛋白（無功能線索），7個表達上調蛋白。上調的蛋白主要參與蚊蟲氧化還原、免疫、代謝等相關功能。
　　【結論】成功構建埃及伊蚊雌蚊感染登革Ⅱ型病毒前后唾液腺差異蛋白質組圖譜，獲得可能受DEN

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