蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究在樂(lè)果脅迫下牡蠣生殖腺和鰓差異表達(dá)的蛋白質(zhì).pdf

1、樂(lè)果(Dimethoate，DM)是目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中使用最為廣泛的有機(jī)磷農(nóng)藥之一。的健康與生存。有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)人類影響最大是大腦，目前已進(jìn)行大量科學(xué)研究，并有詳細(xì)的研究報(bào)道，但對(duì)水生生物的生殖與呼吸系統(tǒng)的毒理學(xué)研究并不多。本論文以牡蠣為實(shí)驗(yàn)物種，以它的生殖腺和鰓為實(shí)驗(yàn)材料，選擇DM為有機(jī)磷農(nóng)藥為污染物和諸多分析技術(shù)研究DM對(duì)牡蠣生殖腺和鰓所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。
　　在濃度為1.0mg/L，2.0mg/L，5.0mg/L樂(lè)果，脅迫48h

2、的條件下，牡蠣的生殖腺和鰓器官中均能檢測(cè)出不同濃度的樂(lè)果殘留量，且組織中樂(lè)果殘留量隨著環(huán)境樂(lè)果濃度增高而呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。這些現(xiàn)象說(shuō)明了樂(lè)果能夠在富集于牡蠣，并遷移且累積在鰓和生殖腺中，影響到鰓和生殖腺執(zhí)行正常的生理功能，可能誘導(dǎo)出許多應(yīng)激功能蛋白。對(duì)牡蠣鰓和生殖腺中的有機(jī)磷農(nóng)藥的過(guò)度使用造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染，土壤中殘留的有機(jī)磷農(nóng)藥可通過(guò)河流的擴(kuò)散作用，最終匯入大海，富集于牡蠣等各種近海養(yǎng)殖水產(chǎn)品體內(nèi)，并通過(guò)食物鏈途徑影響到人類抗氧化酶過(guò)氧

3、化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)酶活性進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在2mg/L樂(lè)果的脅迫下，隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，鰓和生殖腺中的CAT酶和SOD酶活性都呈現(xiàn)出先上升而后降低的趨勢(shì)，這說(shuō)明了樂(lè)果能夠引發(fā)牡蠣的應(yīng)激反應(yīng)，使牡蠣鰓和生殖腺中抗氧化酶活性的提高，并引發(fā)一系列的后續(xù)效應(yīng)，誘導(dǎo)差異蛋白的產(chǎn)生。
　　采用蛋白質(zhì)組學(xué)及相關(guān)的分析技術(shù)篩選出在樂(lè)果脅迫前后，牡蠣生殖腺和鰓中表達(dá)的應(yīng)激差異蛋白.在生殖腺中已鑒定出12個(gè)差異蛋白，其中

4、9個(gè)蛋白表達(dá)量下調(diào)，3個(gè)蛋白表達(dá)量上調(diào);在鰓中已鑒定出14個(gè)差異蛋白，其中11個(gè)蛋白表達(dá)量下調(diào)，3個(gè)蛋白表達(dá)量上調(diào)。針對(duì)這些差異蛋白的生理功能進(jìn)行檢索比對(duì)和文獻(xiàn)查閱，總結(jié)出主要影響的是參與氧化應(yīng)激、能量代謝、DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞周期調(diào)控等過(guò)程有關(guān)重要功能蛋白，其中氧化應(yīng)激相關(guān)的蛋白，如HSTF等表達(dá)量上調(diào)，而FAD依賴的氧化還原酶和Cavortin表達(dá)量卻下調(diào)。DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白中，AGT表達(dá)量上調(diào)，Ribosomal S2表達(dá)

5、量下調(diào)。細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白Cdc2和Megator表達(dá)量下調(diào)，14-3-3蛋白表達(dá)量上調(diào)。能量代謝相關(guān)的蛋白中，Malate dehydrogenase表達(dá)量下調(diào)，而Glutamine synthetase表達(dá)量上調(diào)。采用Real-time PCR技術(shù)進(jìn)一步佐證Cavortin、14-3-3、Ribosomal S2，Malate dehydrogenase等差異蛋白的mRNA表達(dá)量的變化趨勢(shì)，其中這些差異蛋白對(duì)應(yīng)的mRNA表達(dá)量變化