一氧化氮合酶抑制劑對大鼠半乳糖性白內(nèi)障作用的研究.pdf

1、目的：白內(nèi)障是世界首位致盲眼病。盡管多年來國內(nèi)外學(xué)者通過各種方法對其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究，但仍未完全闡明。白內(nèi)障手術(shù)不斷完善的同時，治療白內(nèi)障藥物的研究也取得了很大進(jìn)步，卻始終未能找到能良好控制白內(nèi)障發(fā)生發(fā)展的藥物，因此各國學(xué)者仍在不斷探索研究。近年的研究發(fā)現(xiàn)白內(nèi)障患者的血液、房水、淚液及晶狀體內(nèi)一氧化氮（nitric oxide，NO）和一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）含量均有增高。NO是一種極不穩(wěn)定的生

2、物自由基，分子小，結(jié)構(gòu)簡單，可快速透過生物膜擴(kuò)散，生物半衰期只有3-5秒，其生成依賴于一氧化氮合成酶，因NO存在時間短促，藥物很難對其直接產(chǎn)生作用，大多通過抑制一氧化氮合酶途徑抑制其生成來進(jìn)行研究。本研究應(yīng)用半乳糖制作大鼠白內(nèi)障模型，并用硝基左旋精氨酸甲酯（L-NAME，一氧化氮合酶抑制劑）滴眼液進(jìn)行干預(yù)，裂隙燈顯微鏡下觀察晶狀體的形態(tài)變化，硝酸還原酶法分光光度計(jì)檢測晶狀體內(nèi)一氧化氮和一氧化氮合酶的含量及用流式細(xì)胞技術(shù)分析檢測晶狀體內(nèi)凋

3、亡基因半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表達(dá)量，探討一氧化氮合酶抑制劑對大鼠半乳糖性白內(nèi)障的作用。
　　 方法：健康3周齡Wistar大鼠50只，雌雄各半，體重為50g±1g；實(shí)驗(yàn)前用復(fù)方托吡卡胺滴眼液散瞳檢查，無眼部疾病、雙眼晶狀體透明。隨機(jī)分為3組：A組：空白組10只，無特殊處理，飼以普通顆粒飼料、自由攝水及飲食：B組：模型組20只，同空白組喂養(yǎng)，每日上午8點(diǎn)至9點(diǎn)，頸背部皮下注射濃度為50％的D-半乳糖溶液30ml

4、/kg（即15g/kg/d），連續(xù)注射30天；C組：治療組20只，每日上午8點(diǎn)至9點(diǎn)，頸背部皮下注射濃度為50％的D-半乳糖溶液30ml/kg（即15g/kg/d），同時給予L-NAME滴眼液點(diǎn)眼3/日，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。實(shí)驗(yàn)第10，20，30天，各組Wistar大鼠均以復(fù)方托吡卡胺滴眼液雙眼充分散瞳，行裂隙燈顯微鏡檢查、照相，并進(jìn)行評分；三組動物分別于實(shí)驗(yàn)30天后股動脈放血處死，解剖顯微鏡下取出晶狀體，將其中各組1/2數(shù)量大鼠的雙眼晶狀體用

5、組織搗碎機(jī)制成勻漿測NO及NOS含量；其余1/2大鼠雙眼晶狀體用固定液固定，流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測凋亡基因caspase-3含量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，采用正態(tài)分布檢驗(yàn)、方差分析方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，統(tǒng)計(jì)結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（P<0.05示結(jié)果有顯著性差異）。
　　 結(jié)果：
　　 1裂隙燈觀察各組大鼠晶狀體改變：
　　 1.1裂隙燈下晶狀體照相見附圖；
　　 1.2晶狀體混

6、濁程度評分按照楊彬等報(bào)道的晶狀體混濁程度評分標(biāo)準(zhǔn)對晶狀體混濁程度進(jìn)行分級并評分。整個實(shí)驗(yàn)過程中空白組大鼠的晶狀體始終保持透明；實(shí)驗(yàn)的第10天檢查，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠晶狀體周邊基本上全部出現(xiàn)空泡，占前皮質(zhì)面積的1/3-2/3，評分為0.1-1分，治療組個別大鼠晶狀體仍透明，其他大鼠晶狀體周邊出現(xiàn)少量空泡，評分在0.1-0.7分；至實(shí)驗(yàn)第20天，模型組大鼠晶狀體出現(xiàn)點(diǎn)狀或片狀混濁，評分為2-4分，治療組大鼠晶狀體空泡較前增多，未見明顯點(diǎn)片狀混濁

7、，評分在0.7-1分；至實(shí)驗(yàn)第30天，模型組大鼠晶狀體全部出現(xiàn)核混濁，多數(shù)大鼠晶狀體核全部混濁，評分為4-5分，而治療組大鼠晶狀體僅兩只出現(xiàn)晶狀體核混濁，其余大鼠晶狀體僅見點(diǎn)片狀混濁，評分在2-4分；經(jīng)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，各組間晶狀體密度評分第10、20、30天均有顯著性差異（P<0.05）。
　　 2各組大鼠晶狀體一氧化氮及一氧化氮合酶含量
　　 2.1一氧化氮含量空白組晶狀體內(nèi)一氧化氮含量為01.452±0.152；模型組為2

8、.666±0.466；治療組為1.683±0.344。空白組明顯較模型組及治療組低，模型組高于治療組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，各組間兩兩比較均有顯著性差異（P<0.05）：
　　 2.2一氧化氮合酶含量空白組晶狀體內(nèi)一氧化氮合酶含量為0.016±0.002；模型組為0.037±0.004；治療組為0.027±0.001。模型組一氧化氮合酶含量高于治療組，治療組高于空白組，各組間兩兩比較均有顯著性差異（P<0.05）；
　　 3各組大

9、鼠晶狀體內(nèi)caspase-3含量
　　 經(jīng)流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測，空白組大鼠晶狀體內(nèi)caspase-3含量為339.438±37.937；模型組為697.722±46.453；治療組為650.748±53.074。caspase-3在空白組晶狀體中的含量低，在模型組中caspase-3的含量最高，治療組介于二者之間；各組間兩兩比較均有顯著性差異。（P<0.05）
　　 結(jié)論：
　　 1一氧化氮參與了白內(nèi)障的發(fā)生及發(fā)