誘導型一氧化氮合酶抑制劑對大鼠煙霧吸入性損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 吸入性損傷是早期燒傷患者死亡的主要原因之一，其病理生理學機制與細胞凋亡密切相關，本實驗以大鼠為研究對象，觀察煙霧吸入性損傷后大鼠肺組織病理改變，以及肺組織一氧化氮(Nitric oxide NO)和誘導型一氧化氮合酶(inducible Nitric-oxide synthase iNOS)含量的時程性變化，研究誘導型一氧化氮合酶抑制劑氨基胍(Aminoguanidine AG)對煙霧吸入性損傷大鼠肺組織細胞凋亡和

2、凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2表達的影響，探討iNOS抑制劑對吸入性損傷肺臟保護機制，為臨床治療吸入性損傷提供一定的理論依據。
　　 方法：
　　 第一部分：將36只健康SD大鼠隨機分為2組，正常對照組6只(簡稱對照組)和吸入性損傷組30只(簡稱致傷組)。致傷組分別設2 h、6 h、12 h、24 h、48 h共5個時段，每時段6只大鼠，予以吸入性損傷造模后，每組分別于傷后各時點活殺，觀察肺組織大體變化情況，常規(guī)病理切片

3、HE染色光學顯微鏡下肺組織病理損傷評分變化，肺組織勻漿測NO、iNOS含量變化。
　　 第二部分：將66只健康的SD大鼠隨機分為3組，空白對照組6只(簡稱空白組)、吸入性損傷+AG治療組30只(簡稱治療組)、吸入性損傷組30只(簡稱損傷組)，治療組和損傷組每組分別設2 h、6 h、12 h、24 h、48 h共5個時段，每時段6只大鼠，予以吸入性損傷造模后，治療組立即給予腹腔注射AG100mg/kg，損傷組予等容量生理鹽水。每組

4、分別于傷后各時點活殺，剖胸取肺臟組織，常規(guī)病理切片，免疫組化方法觀察Bcl-2及Bax表達變化，原位缺口末端標記法(TUNEL法)檢測肺臟細胞凋亡情況，計算各時相點相應凋亡指數(apoptosis index AI)。
　　 結果：
　　 第一部分1.大體觀察：致傷組大鼠傷后氣管、支氣管內有粘液或泡沫狀分泌物，粘膜充血腫脹，肺表血濕潤，胸膜下有散在出血斑，肺組織充血腫脹呈暗紅色，傷后2h時變化較局限，12h時變化最明顯。

5、2.HE染色光學顯微鏡下觀察：致傷組各級支氣管壁水腫，肺間質充血水腫，肺泡間隔增厚，腫泡萎陷甚至完全閉塞，部分肺泡可見出血，與對照組比較，致傷組肺組織損傷病理評分在2h開始升高，24h時差異具有顯著性。傷后12h到24h病理損傷發(fā)展最快。3.肺組織勻漿NO、iNOS水平：與對照組相比較，致傷組大鼠的肺組織勻漿NO含量在損傷2h后即有升高，在12h時達到峰值。致傷后2h肺組織勻漿iNOS含量既開始出現升高，6h至12h之間升高的速度最快，

6、至致傷后12h，iNOS含量達到峰值，12h至24h呈顯著下降趨勢。
　　 第二部分1.HE染色：與損傷組比較，治療組大鼠肺組織充血水腫有所減輕，肺泡壁較光滑，肺泡中可見少量中性粒細胞、淋巴細胞浸潤，肺組織淤血水腫較輕。2.免疫組化Bax、Bcl-2以及Bcl-2/Bax比值變化：與空白組比較，損傷組大鼠腫組織Bax表達顯著升高，進行性升高至24小時達到最大值，之后其表達有所下降，但仍顯著高于正常對照組，而治療組與損傷組比較，從

7、6h開始各時間點均可見Bax表達下降。與對照組比較，損傷組Bcl-2表達較恒定，而治療組上調Bcl-2的水平。損傷組Bcl-2/Bax比值隨時間推移一直下降，而治療組的Bcl-2/Bax比值同樣下降，但下降程度低于損傷組。3.肺臟細胞的凋亡變化：TUNEL法顯示，與空白組比較，損傷組在2h后各時間點均可見凋亡指數的升高。損傷后6h和24h治療組AI低于損傷組，12h和48h，兩組AI值無顯著差異。
　　 結論：
　　 大