抗創(chuàng)傷弧菌單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、創(chuàng)傷弧菌（Vibriovulnificus）是一種嗜鹽弧菌，廣泛存在于海水及海產(chǎn)品中，人體可通過生食海鮮或經(jīng)過肢體破損創(chuàng)口接觸海水、海產(chǎn)品而受其感染。常見于海上勞作的漁民及駐海演習人員從而引起敗血癥和軟組織感染。本菌對于糖尿病、酒精性肝病、肝硬化、肝炎、肝功能障礙患者的危害相當嚴重,可引起創(chuàng)傷弧菌膿毒血癥，起病急，進展迅速，死亡率高[1]。快速準確的早期診斷是指導臨床正確用藥從而達到理想治療效果的有力保證；同時，創(chuàng)傷弧菌的治療手段仍為經(jīng)

2、驗性的抗生素應用，然而，隨著細菌對抗生素逐漸出現(xiàn)的不同程度的耐藥現(xiàn)象，找到一種非大劑量應用抗生素的治療也成為亟待解決的問題。單克隆抗體用于疾病的診斷及治療已在醫(yī)學領域得到廣泛開展，并收到了很好的效果。作為我國海域主要致病菌之一的創(chuàng)傷弧菌，至今未見有診斷與治療的單克隆抗體制劑問世，為了解決該菌感染的診斷及防治問題，本研究對其單克隆抗體進行了研究。具體試驗方法如下：
　?。?）通過動物免疫、細胞融合篩選克隆化及ELISA技術制備并鑒定

3、抗創(chuàng)傷弧菌的單克隆抗體。獲得了2株穩(wěn)定分泌抗創(chuàng)傷弧菌的雜交瘤細胞株，命名為1A2（IgG1）和2D6（IgG2a）。經(jīng)測定雜交瘤細胞培養(yǎng)上清及其誘生的腹水mAb效價分別為1×10-2，1×10-3和1×10-4，1×10-5。經(jīng)交叉試驗，2D6與溶藻弧菌、遲緩愛德華菌、鰻弧菌、溫和氣單胞菌以及嗜水氣單胞菌均不產(chǎn)生交叉反應，可以應用于創(chuàng)傷弧菌感染的快速檢測。
　?。?）以創(chuàng)傷弧菌分別感染乳鼠為模型，對1A2和2D6的治療保護效果進行

4、研究。結果顯示:1A2和2D6均能提高受創(chuàng)傷弧菌感染的乳鼠的存活率，分別為62.50％和37.50％，1A2具有明顯的保護作用。
　　本實驗通過雜交瘤技術共獲得2株分泌抗創(chuàng)傷弧菌單克隆抗體的雜交瘤細胞株1A2和2D6。2株雜交瘤細胞的培養(yǎng)上清及腹水能在較長時間內(nèi)基本保持穩(wěn)定。其中，1A2的培養(yǎng)上清、腹水效價及親和力均高于2D6；2D6與溶藻弧菌、遲緩愛德華氏菌、鰻弧菌、溫和氣單胞菌以及嗜水氣單胞菌均不產(chǎn)生交叉反應，可以應用于創(chuàng)傷弧