植物病原真菌拮抗放線菌的篩選及其發(fā)酵條件研究.pdf

1、本文為了適應當前防治植物病害的發(fā)展方向，開發(fā)高效、低毒的農(nóng)用抗生素，從遼寧省沈陽市、大連市及吉林省四平市等地區(qū)采集土樣20份分離出放線菌，從所分離的放線菌中尋找具有高效抗真菌活性的農(nóng)用抗生素，并對其菌株的分類地位、發(fā)酵條件優(yōu)化、分離純化及結構鑒定等方面進行了系統(tǒng)的研究，為今后的抗植物病原真菌病害的藥劑開發(fā)提供實踐經(jīng)驗和理論依據(jù)。 1、通過廣泛篩選，獲得了目的生防菌株YZ5。利用稀釋分離法從遼寧省8個地區(qū)及吉林省四平市20份樣品的

2、土壤中共分離到各種放線菌菌株156份，采用活體平板測定法共獲得對植物病原真菌具有拈抗作用的放線菌菌株14株：采用杯碟法測定篩選的各菌株發(fā)酵液抑菌活性，其中發(fā)酵液抑菌圈直徑超過15mm的菌株有4株。將這4株菌株進行了進一步的驗證試驗，結果表明，菌株YZ5無論是活體還是其發(fā)酵液對7種供試病原菌均表現(xiàn)較強的抑菌效果，發(fā)酵濾液稀釋10倍后對番茄葉霉病菌的抑制率達81.8％。 2、利用傳統(tǒng)分類法明確了菌株YZ5的分類地位。通過對菌株YZ5

3、的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特性進行研究，推測YZ5屬于金色類群中的龜裂鏈霉菌(Streptomyces rimosus)的近源變種。 3、研究明確了菌株YZ5的最佳發(fā)酵條件，為YZ菌素進入中試階段奠定了良好的基礎。通過單因子試驗，菌株YZ5利用碳源產(chǎn)抗生素從高到低依次為蔗糖>葡萄糖>淀粉>麥芽糖>乳糖；利用氮源產(chǎn)抗生素以玉米粉和黃豆粉為最好，其它依次為蛋白胨、酵母粉、(NH4)2SO4、氨水。通過正交試驗設計，對菌株YZ5發(fā)

4、酵條件的相關方程進行回歸分析，其發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳配方為蔗糖7.93％，玉米粉2.23％，(NH4)2SO40.233％，CaCO3 0.442％，NaCl 0.225％。選用最優(yōu)化的培養(yǎng)基配方，菌株YZ5的最佳發(fā)酵條件為28℃，150r/min，20％的接種量，起始pH值為7，發(fā)酵培養(yǎng)120h，菌株YZ5產(chǎn)素最多。YZ菌素整個發(fā)酵過程中，總糖、總氮的含量逐漸減少。 4、采用Doskochilova溶劑系統(tǒng)、pH紙層析和紙電泳，分