辣椒疫病拮抗內生放線菌的篩選及其發(fā)酵培養(yǎng)條件研究.pdf

1、通過皿內對峙試驗從242株供試內生放線菌中篩選到辣椒疫霉病菌拮抗菌62株，抑菌帶寬度≥5mm的24株，占試驗總菌株的10％，分別分離自黃瓜、牛蒡等9種植物的根部、莖部和葉片。用管碟法進行抑菌活性復篩，發(fā)現其中6株的無菌濾液對辣椒疫霉病菌和大豆疫霉病菌的抑菌圈直徑≥20mm，其中gCLA4的抑菌活性最強。進一步的研究結果表明，該菌株的無菌濾液能夠強烈抑制病菌孢子囊的形成及游動孢子的釋放，原液對孢子囊形成及游動孢子釋放的抑制率分別高達100

2、％和96.2％，稀釋50倍后的抑制率仍分別達95.3％和85.6％，并且對其菌絲生長也有明顯的抑制作用，無菌濾液在15.0％稀釋終濃度下的菌絲生長抑制率為87.2％。溫室盆栽試驗結果表明，菌株gCLA4對苗期的辣椒疫病有較好防效。接種疫霉菌前48h、24h和0h以20ml/盆(2株/盆)澆灌gCLA4菌株無菌濾液于辣椒苗基部土壤，接種后7d調查病株率，顯示其防效分別達100％、92.3％和80.8％，而接種14d后分別為77.8％、55

3、.6％和36.1％。 對其搖瓶種子液培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基以及發(fā)酵條件進行了研究，初步篩選出適合內生放線菌gCLA4產生抗菌物質的種子液培養(yǎng)基為黃豆粉培養(yǎng)基，培養(yǎng)36h其生物量達最大；發(fā)酵液的培養(yǎng)基最適配方為：1％葡萄糖、0.4％可溶性淀粉、0.2％甘油、2％黃豆粉、0.4％蛋白胨、0.6％(NH<,4>)SO<,4>、0.2％NaCl、0.03％MgSO<,4>·7H<,2>O、0.1％CaCO<,3>、0.02％KH<,2>PO

4、<,4>，初始pH為605～7.0。最適發(fā)酵培養(yǎng)條件為：接種量12％，裝液量50mL/250mL瓶，溫度28℃，轉速1.50r/min，培養(yǎng)時間96h。 內生放線菌gCLA4發(fā)酵液的粗提物對辣椒疫霉菌孢子囊的形成，游動孢子的釋放以及菌絲生長均具有較強的抑制作用。當粗提物濃度為6mg/mL時，對辣椒疫霉菌孢子囊形成，游動孢子釋放的抑制率分別為95.0％和90.4％，對辣椒疫霉菌絲生長的抑制率為95.6％。隨著粗提物濃度的降低其抑制