單寧酶產(chǎn)生菌的篩選及其發(fā)酵條件研究.pdf

1、單寧酶全稱單寧酯酰水解酶（Tannase,EC 3.11.20），可以水解單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵，生成沒食子酸和葡萄糖。微生物產(chǎn)單寧酶主要來源于真菌，目前研究最多的產(chǎn)酶微生物是青霉和黑曲霉。本文從產(chǎn)單寧酶菌株的篩選開始，對單寧酶發(fā)酵工藝條件以及部分酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究，主要研究結(jié)果如下：
　　 ⑴采用平板透明圈法和固體發(fā)酵篩選相結(jié)合的方法，從土壤中分離、篩選得到了一株產(chǎn)單寧酶的黑曲霉菌株A-6，初篩酶活力為8.1U/g。
　

2、　 ⑵在固體發(fā)酵的基礎(chǔ)上，通過對培養(yǎng)基組分進(jìn)行單因素實驗和響應(yīng)面實驗分析，確定了菌株A-6的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：在250mL三角瓶中裝入5g麩皮和5mL營養(yǎng)液；營養(yǎng)液的組成為（g/L）：蔗糖12、KNO3 2.5、玉米漿22.4、五倍子65.1、MgSO4 1.36、CoCl2 0.2、檸檬酸鈉3.0、NaCl 2.5；通過對接種量、發(fā)酵溫度、初始pH值、固液比等培養(yǎng)條件的考察，獲得了菌株A-6的較優(yōu)培養(yǎng)條件：接種量1mL的孢子懸液

3、(濃度為11×109個/mL)，發(fā)酵溫度30℃，初始pH7.0，固液比1:1.8，發(fā)酵時間108h左右。菌株A-6在最佳培養(yǎng)基和較優(yōu)培養(yǎng)條件下，酶活可達(dá)15.68U/g，比優(yōu)化前提高了約94％。
　　 ⑶對菌株A-6粗酶性質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，結(jié)果表明：菌株A-6所產(chǎn)單寧酶在4℃儲存時穩(wěn)定性好，貯存8周后依然保存有94％的酶活性；最適作用溫度為60℃左右，在65℃以下穩(wěn)定性較好，超過75℃易失活；最適作用pH8.0，在pH6.0-