宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌中Cyclin D1、Ki-67的表達(dá)與HPV感染相關(guān)性的研究.pdf

1、宮頸鱗癌是常見的婦科惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展可能由多種致癌因素引起。近年來的研究表明，高危型的人乳頭瘤病毒（HPV）與宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）和宮頸鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)，但對(duì)其具體機(jī)制尚未明了。20世紀(jì)90年代以來，隨著對(duì)腫瘤研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞調(diào)亡對(duì)維持正常細(xì)胞的穩(wěn)定性至關(guān)重要，細(xì)胞增殖能力的異常改變和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)異常及細(xì)胞調(diào)亡調(diào)節(jié)機(jī)制的失控，與癌變過程密切相關(guān)。細(xì)胞周期G1期到S期轉(zhuǎn)換點(diǎn)是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)過程中的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，細(xì)

2、胞周期蛋白D1（Cyclin D1）是調(diào)節(jié)這一關(guān)鍵的細(xì)胞周期G1期向S期轉(zhuǎn)換的重要正性調(diào)節(jié)因子，Cyclin D1表達(dá)增強(qiáng)可反映細(xì)胞增殖加速。另外，增殖細(xì)胞核抗原（Ki-67）是目前已知的增殖抗原中最能反映細(xì)胞增殖能力蛋白標(biāo)志物，可輔助用于鑒別疾病良、惡性以及評(píng)估預(yù)后及療效等指標(biāo)。但Cyclin D1、Ki-67在宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用尚不清楚。本研究通過了解Cyclin D1、Ki-67在CIN及宮頸鱗癌發(fā)病的相關(guān)性及Cyclin

3、D1、Ki-67與HPV感染之間的相互關(guān)系，以探討Cyclin D1、Ki-67在CIN及宮頸鱗癌發(fā)病巾的作用，探討其能否作為預(yù)測(cè)CIN預(yù)后的指標(biāo)之一。 目的： 1．探討Cyclin D1、Ki-67在CIN及宮頸鱗癌的發(fā)生及發(fā)展中的作用。 2．了解Cyclin D1、Ki-67與HPV感染之間的相關(guān)性，以探討Cyclin D1、Ki-67蛋白表達(dá)能否作為預(yù)測(cè)CIN預(yù)后的指標(biāo)之一。 方法： 1、研

4、究對(duì)象：選取北京大學(xué)深圳醫(yī)院2003年1月-2008年6月病理確診為CINⅠ-CINⅢ級(jí)及宮頸鱗癌的患者176例（其中CINⅠ組57例、CINⅡ51例、CINⅢ39例、宮頸鱗癌29例），同期選取宮頸活檢病理確診為正常上皮或柱狀上皮異位30例為對(duì)照組。所有患者術(shù)前進(jìn)行常規(guī)婦檢，液基細(xì)胞學(xué)檢查、高危型HPV檢查、陰道鏡下活檢，CIN的標(biāo)準(zhǔn)參照Richard CIN分級(jí)。 2、方法：應(yīng)用免疫組化（IHC）Elivision plus法

5、檢測(cè)宮頸病變組織中Cyclin D1、Ki-67蛋白的表達(dá)，結(jié)果判斷：采用CMIAS007真彩色醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（軟件由空軍總醫(yī)院和北京航空航天工業(yè)大學(xué)聯(lián)合研制）。根據(jù)圖像分析所得吸光度進(jìn)行分級(jí)評(píng)分：<5％為陰性（-），5～25％為弱陽性（+），25～50％為陽性（++），≥50％為強(qiáng)陽性（+++）。 應(yīng)用雜交捕獲二代（Hybrid capture2，HC2）檢測(cè)宮頸分泌物中HPV感染的情況，結(jié)果判斷：陽性對(duì)照的均值為臨界值，標(biāo)

6、本讀數(shù)與臨界值比值≥1為陽性，<1為陰性，3孔陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)差要<15％、3孔陽性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)差必須<25％，陽性對(duì)照均值與陰性對(duì)照均值比值必須>2．0。 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:運(yùn)用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件包建立數(shù)據(jù)庫，錄入所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料的統(tǒng)計(jì)描述用率或構(gòu)成比表示，不同組間率或構(gòu)成比的差異性用X2檢驗(yàn)等級(jí)資料的差異性用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)量資料的統(tǒng)計(jì)描述用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間均數(shù)的比較用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，等級(jí)資料間的相關(guān)性用

7、Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P<0．05作為差異的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果： 一、Cyclin D1蛋白在各組宮頸組織的細(xì)胞核及細(xì)胞漿中表達(dá) 1、Cyclin D1在對(duì)照組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ及宮頸鱗癌組細(xì)胞漿及細(xì)胞核中表達(dá)的陽性率分別為96．67％，87．72％，90．2％，92．31％及44．83％。對(duì)照組以弱陽性表達(dá)為主，CINⅠ組以弱陽性及陽性表達(dá)為主，CINⅠ組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CIN

8、Ⅱ組以弱陽性表達(dá)為主，CINⅡ組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CINⅡ組與CFNⅠ組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CINⅢ組陽性表達(dá)，CINⅢ組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CINⅢ組與CINⅡ級(jí)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CINⅢ與CINⅠ比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、宮頸鱗癌組Cyclin D1明顯下調(diào)，陽性率僅為44．8％，陽性表達(dá)強(qiáng)度最低，與對(duì)照組及各組CIN組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、各組級(jí)別與Cyclin D1蛋白表達(dá)相

9、關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)r=-0．128，P=0．07，不同級(jí)別與Cyclin D1表達(dá)無相關(guān)性。 二、Ki-67蛋白在各組宮頸組織細(xì)胞的細(xì)胞核的表達(dá) 1、Ki-67蛋白在對(duì)照組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ及宮頸鱗癌組細(xì)胞核中的表達(dá)陽性率分別為93．33％，91．23％，90．20％，100％，96．55％；對(duì)照組Ki-67蛋白表達(dá)呈弱陽性表達(dá)為主，CINⅠ組陽性表達(dá)為主，CINⅠ組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CINⅡ組

10、弱陽性和陽性表達(dá)為主，CINⅡ組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CINⅡ組與CINⅠ組比較差異有顯著意義，CINⅢ組陽性和強(qiáng)陽性表達(dá)為主，CINⅢ組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,CINⅢ組與CINⅡ比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CINⅢ組與CINⅠ組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、在宮頸鱗癌組中Ki-67表達(dá)明顯增強(qiáng)，宮頸鱗癌組與對(duì)照組比較,與CINⅠ組比較,與CINⅡ組比較,與CINⅢ組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、各組級(jí)別與Ki-

11、67蛋白表達(dá)相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)r=0．301，P<0．05。不同級(jí)別與Ki-67表達(dá)無相關(guān)性。 三、高危型HPV的檢測(cè)結(jié)果：高危型HPV在對(duì)照組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、宮頸鱗癌組中表達(dá)陽性率分別為0％、52．63％、58．82％、82．05％、100％，CINⅡ級(jí)組與CINⅠ級(jí)組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其余各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 四、Cyclin D1與高危型HPV感染的相關(guān)分析中，相關(guān)系數(shù)r=-0．115，

12、P=0．103，兩者無相關(guān)性。Ki-67與高危型HPV感染的相關(guān)分析中，相關(guān)系數(shù)r=0．228，P<0．05，提示兩者有相關(guān)性。 結(jié)論： 1．從柱狀上皮異位→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宮頸鱗癌發(fā)展過程中，Ki-67蛋白陽性表達(dá)呈逐漸升高趨勢(shì)，Ki-67蛋白表達(dá)有可能作為子宮頸上皮內(nèi)瘤變預(yù)后預(yù)測(cè)指標(biāo)之一。 2．從柱狀上皮異位→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ發(fā)展過程中，Cyclin D1蛋白的表達(dá)未見明顯的相關(guān)性，