交沙霉素的分離純化工藝研究.pdf

1、交沙霉素(josamycin)是屬于十六元大環(huán)內(nèi)酯類抗生藥物，它是一種廣譜抗菌素，其抗菌譜與紅霉素相似，但是副作用較小且不易使病菌產(chǎn)生抗藥性。本課題的主要內(nèi)容是研究交沙霉素的分離提取和純化工藝。主要取得了一下成果： 首先，建立了關(guān)于交沙霉素的分析檢測(cè)方法，包括生物測(cè)定法和高效液相色譜法。其中高效液相色譜法具有快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，適用于測(cè)定發(fā)酵液及各個(gè)分離環(huán)節(jié)中的含量。通過(guò)改變流動(dòng)相的比例，緩沖液的濃度和酸堿度，經(jīng)過(guò)優(yōu)化后的色譜條件

2、是：色譜柱用碳十八烷基硅膠鍵合柱；流動(dòng)相是甲醇和磷酸緩沖液，其比例是80:20；檢測(cè)波長(zhǎng)是232nm；流速是1ml/min；進(jìn)樣量是10ul；柱溫是室溫。在上述條件下交沙霉素的保留時(shí)間為6.412min，與其他雜質(zhì)峰的分離度大于1.5。 在大孔樹(shù)脂吸附分離法的研究中，從幾種常用的大孔樹(shù)脂中篩選出了XAD-16樹(shù)脂為吸附劑，優(yōu)化后的吸附條件為：吸附流速為O.5ml/min；pH為10；加入1％的氯化鈉的鹽濃度。解吸的時(shí)用乙醇為解吸

3、劑，優(yōu)化后的洗脫條件：70％和100％兩種濃度的乙醇為洗脫劑，采用梯度洗脫的方式，先用70％的乙醇洗脫，大量的雜質(zhì)及色素被洗脫；然后用100％的乙醇將有效成分洗脫下來(lái)。 在溶媒萃取法提取的試驗(yàn)中，由于交沙霉素在發(fā)酵液中大部分存在于菌絲體中，所以試驗(yàn)中將發(fā)酵液調(diào)pH值到9，然后離心分離，將菌絲體與輕質(zhì)碳酸鈣粉末以質(zhì)量比為1:1的比例混合均勻，在真空干燥箱中50℃條件下干燥6小時(shí)。將干燥的菌絲體均勻粉碎大小顆粒為20目。干燥菌絲體顆

4、粒用95％浸提乙醇，通過(guò)設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)得到用95％乙醇浸提干燥菌絲體顆粒的最優(yōu)條件是：每10克干燥菌絲體用20毫升95％乙醇；浸提時(shí)間為36小時(shí)；浸提溫度為室溫；浸提次數(shù)為3次。 在交沙霉素的精制階段，用200-300目的層析硅膠裝柱，用氯仿:甲醇=2:3比例配制的洗脫液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮(真空度為0.095Mpa，溫度為50℃)。濃縮液揮干后得到黃色粉末狀的交沙霉素，然后用pH3.5的酸化水溶解該粉末。將交