腫瘤特異性標(biāo)志及生物靶向納米制劑的研究.pdf

1、腫瘤特異性標(biāo)志及生物靶向納米制劑腫瘤特異性標(biāo)志及生物靶向納米制劑的研究的研究InvestigationofthetumspecificInvestigationofthetumspecificbiomarkersevaluationofbiomarkersevaluationofbiotargeteddrugnanoparticlesbiotargeteddrugnanoparticles一級學(xué)科：生物醫(yī)學(xué)工程一級學(xué)科：生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)科

2、專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)科專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程作者姓名：牛瑞芳作者姓名：牛瑞芳指導(dǎo)教師：常津教授指導(dǎo)教師：常津教授天津大學(xué)精密儀器與光電子工程學(xué)院天津大學(xué)精密儀器與光電子工程學(xué)院二零一二年五月二零一二年五月中文摘要中文摘要腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性都是多基因參與、多步驟調(diào)控的過程。隨著多種蛋白組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使得以承擔(dān)生命活動的基本執(zhí)行體的蛋白質(zhì)水平的高通量研究成為可能，同樣從蛋白質(zhì)整體水平進行研究則更有可能來揭示腫瘤的本質(zhì)，更

3、有可能發(fā)現(xiàn)信號傳導(dǎo)途徑中的關(guān)鍵節(jié)點蛋白，找到具有應(yīng)用價值的靶點蛋白，進而使得個體化診斷和靶向治療得以飛速發(fā)展。本課題首先采用比較蛋白組學(xué)的高通量技術(shù)，篩選和驗證與乳腺癌耐藥和轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白質(zhì)標(biāo)志物。成功建立并優(yōu)化了雙向凝膠電泳分離細(xì)胞總蛋白的方法，并對部分存在顯著差異表達(dá)的蛋白質(zhì)進行了MALDITOFMS質(zhì)譜鑒定，獲得了差異表達(dá)蛋白的肽質(zhì)量指紋圖譜（PMF），通過生物信息學(xué)的方法進行檢索，最終識別出11個差異表達(dá)蛋白。這些差異表達(dá)蛋白分別

4、涉及腫瘤轉(zhuǎn)移、能量代謝、細(xì)胞增殖等，另外還包括一個功能未知蛋白。針對篩選并經(jīng)過驗證的相關(guān)基因Annexina2，應(yīng)用RNA干擾技術(shù)降低人高轉(zhuǎn)移乳腺癌MDAMB231細(xì)胞中Annexina2蛋白的表達(dá)水平，獲得3株Annexina2表達(dá)水平下降80%100%的穩(wěn)定細(xì)胞株。進一步的細(xì)胞功能學(xué)實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)Annexina2表達(dá)與高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲等生物學(xué)特性相關(guān)，并證實了Annexina2通過與轉(zhuǎn)錄因子STAT3相互作用影響增

5、殖相關(guān)基因（cmyc和cyclinD1）和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（MMP2及MMP9）的表達(dá)的作用機制。結(jié)果證明Annexina2在腫瘤進展過程中承擔(dān)著重要作用，其有可能成為抑制腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的有效的藥物靶點。同時在課題組前期工作基礎(chǔ)上，我們以腫瘤細(xì)胞膜上高表達(dá)的葉酸受體作為靶點，通過將聚乳酸羥基乙酸共聚物(poly(lacticcoglycolicacid)，PLGA)微球制備技術(shù)同脂質(zhì)體制備技術(shù)相結(jié)合，制備了具有核殼結(jié)構(gòu)的納米載體(folic

6、acidmodifiedlipidshellpolymercenanoparticlesFLPNPs)。該載體包括了核結(jié)構(gòu)PLGA、賴氨酸殼聚糖十八烷基季銨鹽（octadecylquaternizedlysinemodifiedchitosanOQLCS）作為脂質(zhì)體的殼、靶向制劑（葉酸）和膽固醇。我們的研究數(shù)據(jù)表明，包裹脂質(zhì)體層后，納米載體的突釋作用得到了明顯的減弱。流式細(xì)胞術(shù)和共聚焦顯微鏡證實，不僅在葉酸受體高表達(dá)的Hela細(xì)胞還是在