利用肺癌特異性結(jié)合多肽ZS6篩選肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物.pdf

1、目的：利用本實(shí)驗(yàn)室已獲得的與肺癌特異性結(jié)合的十二肽ZS6從人類肺癌cDNA文庫(kù)中篩選出肺癌相關(guān)標(biāo)志物，并對(duì)相關(guān)的標(biāo)志物在肺癌形成中的作用進(jìn)行初步研究，為肺癌的臨床早期診斷和治療奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：通過(guò)化學(xué)方法合成多肽ZS6并部分標(biāo)記綠色熒光素異硫氰酸(FITC)。利用細(xì)胞免疫熒光、組織免疫熒光鑒定多肽ZS6-FITC與人肺癌細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞、人結(jié)腸癌細(xì)胞、人肺癌組織結(jié)合的親和力和特異性。然后，通過(guò)多肽ZS6-FITC在荷瘤裸

2、鼠體內(nèi)的分布實(shí)驗(yàn)觀察ZS6在荷人肺癌A549裸鼠體內(nèi)的分布情況，使用液相色譜法測(cè)定多肽ZS6的體外穩(wěn)定性及其在大鼠體內(nèi)代謝分布情況。為了進(jìn)一步研究多肽ZS6與肺癌的結(jié)合位點(diǎn)，我們以生物素標(biāo)記的十二肽ZS6為探針，通過(guò)化學(xué)方法合成生物素(Biotin)偶聯(lián)的多肽ZS6，將ZS6 Biotin固定在親和素(avidin)包被的酶標(biāo)板板上，篩選人類肺癌cDNA噬菌體展示文庫(kù)，經(jīng)過(guò)四輪減性篩選后，挑取與ZS6特異性結(jié)合的噬菌體單克隆、擴(kuò)增、純化

3、，再通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增、產(chǎn)物純化后，進(jìn)行DNA測(cè)序，測(cè)序結(jié)果經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)分析。
　　 結(jié)果：篩選出18個(gè)與ZS6特異性結(jié)合的T7噬菌體克隆，所得結(jié)果在美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心Blast數(shù)據(jù)庫(kù)(www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)進(jìn)行比對(duì)得出5種蛋白，其中出現(xiàn)頻率最高的是GSTA1，所占比例為44.4[％]。其余的均已確定為腫瘤相關(guān)基因。
　　 結(jié)論：從人類肺癌cDNA噬菌體展示文庫(kù)中篩選得到潛在的肺癌