利用噬菌體展示技術(shù)篩選肺癌特異性多肽及新的腫瘤標(biāo)志物.pdf

1、廣東藥學(xué)院碩士學(xué)位論文利用噬菌體展示技術(shù)篩選肺癌特異性多肽及新的腫瘤標(biāo)志物姓名：石磊申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：藥劑指導(dǎo)教師：臧林泉陳一岳20090501廣東藥學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文中文摘要II我們將這10條序列分別命名為zs1、zs2zs10。其中zs6出現(xiàn)了13次，重復(fù)的頻率最高，達(dá)到了54.2%；zs6編碼由3個Thr(T)，2個Leu(L)，2個His(H)，1個Ala(A)，1個Asp(D)，1個Arg(R)，1個Pro(P)，1

2、個Trp(W)組成的12肽，其氨基酸序列為ADHPPW。該序列與包括肺癌在內(nèi)的惡性腫瘤的關(guān)系尚未見文獻(xiàn)報道。我們通過化學(xué)方法合成多肽zs6并部分標(biāo)記綠色熒光素異硫氰酸（FITC）。首先，利用細(xì)胞免疫熒光、組織免疫熒光鑒定多肽[zs6]FITC與肺癌細(xì)胞、人肺癌組織結(jié)合的特異性和親和力。細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示[zs6]FITC對肺鱗癌細(xì)胞NCIH1299具有高親和力，并且對肺腺癌細(xì)胞A549同樣具有較高親和力，但與肺正常細(xì)胞MRC5結(jié)合

3、能力很弱。組織免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示[zs6]FITC與人肺癌組織的結(jié)合能力顯著高于肺正常組織的；同時，人肺癌組織芯片實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，[zs6]FITC用于臨床肺癌鑒定的陽性率可達(dá)到24.8%。然后，通過多肽[zs6]FITC在荷瘤裸鼠體內(nèi)的分布實(shí)驗(yàn)觀察[zs6]FITC在荷人肺癌A549裸鼠體內(nèi)的分布情況及其穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示[zs6]FITC在腫瘤部位分布較多，有較好的靶向性，其次，在主要代謝器官肝臟、腎臟組織也有分布，但在裸鼠大腦、

4、心臟、肺臟等正常組織則未見及分布。為了進(jìn)一步研究多肽zs6與肺癌的結(jié)合位點(diǎn)，我們通過化學(xué)方法合成生物素（Biotin）偶聯(lián)的多肽zs6，將[zs6]Biotin固定在親和素（avidin）包被的酶標(biāo)板板上，與人肺癌cDNA文庫進(jìn)行4輪篩選，挑取單克隆PCR擴(kuò)增、純化后進(jìn)行測序。對序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)與該多肽特異性結(jié)合的肺癌抗原有Envoplakin、ATPase和987bp的未知蛋白。（1）目前，未見Envoplakin與肺癌相

5、關(guān)的任何報道。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)Envoplakin在非小細(xì)胞肺癌（腺癌和鱗癌）有大量表達(dá)，而在小細(xì)胞肺癌則表達(dá)量較少。因此，可能可以作為非小細(xì)胞肺癌（腺癌和鱗癌）的診斷標(biāo)志物。（2）ATPase廣泛存在與已知的各種生命形式，對肺癌研究不具有特異性價值；（3）987bp的未知序列經(jīng)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)其與人類基因及基因組未見同源性，表明我們可能發(fā)現(xiàn)了新的腫瘤特有的抗原，確認(rèn)其在肺癌與正常組織中的差異將闡明一新的肺癌診斷和治療靶點(diǎn)，為肺癌的