CHD5對乳腺癌細(xì)胞生長和浸潤過程的抑制作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：癌癥是一種嚴(yán)重影響公眾健康的疾病，而乳腺癌則是女性中最常見的癌癥。據(jù)統(tǒng)計，美國2011年新增乳腺癌病理230，480例，占新發(fā)癌癥總數(shù)的30％，死亡39，520例，占總死亡數(shù)的15％。近年來，我國乳腺癌發(fā)病率逐年上升，已躍升為一些大城市女性腫瘤的第一位，并呈現(xiàn)年輕化的趨勢。由此可見，乳腺癌的預(yù)防、治療及研究是迫在眉睫的任務(wù)。研究乳腺癌相關(guān)發(fā)病基因及其作用機(jī)理，是尋找新的診斷及治療靶點的一個重要方面。
　　 染色質(zhì)重塑及

2、DNA解旋酶蛋白5(chromodomain helicase DNA bindingprotein5，CHD5)是2003年發(fā)現(xiàn)的一個新基因。Bagchi等人對小鼠模型的研究證實，Chd5基因可以促進(jìn)小鼠細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化，從而發(fā)揮抑癌基因的功能。此外，CHD5基因所在的人類染色體1p36區(qū)，在多種癌癥包括乳腺癌中均發(fā)生缺失，提示CHD5在乳腺癌的發(fā)生及進(jìn)展過程中可能也發(fā)揮抑癌基因的功能。
　　 研究內(nèi)容：我們運用R

3、CR擴(kuò)增及測序的方法檢測了55個乳腺癌樣品中CHD5基因編碼區(qū)及外顯子兩側(cè)剪切位點的突變情況；運用實時定量PCR(real-time PCR)的方法檢測了44個乳腺癌樣品中CHD5基因拷貝數(shù)的變化情況；運用亞硫酸氫鈉處理及克隆測序的方法檢測了39個乳腺癌樣品中CHD5基因啟動子區(qū)的甲基化情況；分別運用實時定量PCR及免疫組織化學(xué)染色(immunohistochemical(IHC)staining)的方法檢測了90個乳腺癌樣品中CHD5

4、基因mRNA的表達(dá)以及289個乳腺癌樣品中CHD5蛋白的表達(dá)變化。此外，我們通過細(xì)胞及動物實驗，研究了CHD5基因在體外及體內(nèi)對細(xì)胞增殖的影響，及其在體外對細(xì)胞浸潤的影響。并初步探討了乳腺癌中CHD5發(fā)揮其功能的分子機(jī)制。
　　 研究結(jié)果：CHD5基因在乳腺癌中很少發(fā)生突變，我們只在MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞系中檢測到一個移碼突變，該突變位于CHD5染色質(zhì)解旋酶/ATP酶結(jié)構(gòu)域。CHD5基因拷貝數(shù)有頻繁的半合性缺失，而且其基

5、因啟動子區(qū)頻繁發(fā)生高甲基化，導(dǎo)致乳腺癌樣品中CHD5 mRNA表達(dá)水平顯著下降。去甲基化試劑處理可顯著增加CHD5 mRNA在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)。乳腺癌臨床樣本中，CHD5 mRNA表達(dá)下調(diào)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P=0.026)。免疫組化分析顯示，CHD5蛋白表達(dá)水平在乳腺癌樣本中顯著降低，而且其表達(dá)下調(diào)和腫瘤高組織學(xué)級別(histological grade)、雌激素/孕激素陰性(ER/PR-negative)、HER2陽性(HER

6、2-positive)以及乳腺癌遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)(P≤0.01)。此外，CHD5表達(dá)下調(diào)或缺失的病人，其無病生存率(progression-free survival)及總生存率(overall survival)均顯著下降。從功能方面來看，CHD5可以抑制MDA-MB-231及Hs578T乳腺癌細(xì)胞在體外的增殖，減慢細(xì)胞周期進(jìn)程，并可抑制MDA-MB-231細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤。CHD5還可抑制MDA-MB-231及Hs578T乳腺