PCDH10對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移抑制作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:我們課題組前期已發(fā)現(xiàn) PCDH10在乳腺癌細(xì)胞株及組織中均存在甲基化現(xiàn)象，并于正常乳腺上皮細(xì)胞及組織差異明顯。本課題擬進(jìn)一步探討 PCDH10表達(dá)及甲基化與其對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，及其可能的機(jī)制，
　　方法:構(gòu)建結(jié)合在腺病毒載體上的AdHu5-PCDH10質(zhì)粒,在人胚腎細(xì)胞HEK293中包裝、擴(kuò)增,并通過RT-PCR、western blot驗(yàn)證。而后將擴(kuò)增到一定滴度的腺病毒 AdHu5-PCDH10感染目的細(xì)胞MD

2、A-MB231、SK-BR-3（均因甲基化表達(dá)缺失 PCDH10），使其高表達(dá)PCDH10，通過Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、鬼筆環(huán)肽染色等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)表達(dá) PCDH10后對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移的影響；通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞的周期、凋亡，以及 CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。并在裸鼠成瘤后，給予AdHu5-PCDH10皮下注射，在體內(nèi)驗(yàn)證其抑制乳腺癌的作用。進(jìn)一步通過蛋白免疫印跡尋找其可能參

3、與的信號(hào)通路。
　　結(jié)果:在體外功能實(shí)驗(yàn)中，給予感染AdHu5-PCDH10后外源性表達(dá)的MDA-MB231和SK-BR-3，與感染AdHu5-GFP和未處理組相比，遷移及侵襲能力明顯減弱（P<0.001）、粘附能力增強(qiáng)（P<0.05）、凋亡增加（P<0.01）、生長(zhǎng)受限（P<0.01）、細(xì)胞周期阻滯與G0/G1期（P<0.05），肌動(dòng)蛋白F-actin受抑制。進(jìn)一步在BALB/C裸鼠給予MDA-MB231注射成瘤后給予AdHu5

4、-PCDH10皮下注射后，與AdHu5-GFP和PBS注射組相比，瘤體積明顯縮?。?P<0.05），核增殖抗原 Ki67表達(dá)下調(diào)（P<0.001）。蛋白免疫印跡發(fā)現(xiàn)表達(dá)PCDH10后，可以抑制β-catenin、活化的β-catenin、失活的磷酸化的GS3Kβ、CyclinD1、MMP-7,C-Myc、C-jun、磷酸化的C-jun表達(dá)，同時(shí)GS3Kβ表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論:在乳腺癌中，PCDH10可以明顯抑制其增殖、侵襲能力，這