大網(wǎng)膜聯(lián)合自體心房組織移植治療大鼠慢性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分:大網(wǎng)膜聯(lián)合自體心房組織移植治療大鼠慢性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:
　　 組織工程心肌為心肌梗死的治療提供了新的途徑,由于缺乏足夠的血供,現(xiàn)有的方法無法構(gòu)建出具有足夠體積和生物學(xué)功能的心肌組織而應(yīng)用于臨床。本研究的主要目的是探討自體心房組織以及大網(wǎng)膜聯(lián)合移植對慢性心肌梗死大鼠心臟功能以及心律失常的影響。
　　 方法:
　　 通過前降支結(jié)扎法建立大鼠心肌梗死模型。3周后將篩選合格的模型動物隨機(jī)

2、分為4組:對照組(Con group),僅再次開胸；心房移植組(A group),開胸后裁取左心耳組織移植于心肌梗死及周邊區(qū)；大網(wǎng)膜移植組(O group):經(jīng)膈肌將大網(wǎng)膜移植于心肌梗死及周邊區(qū)；聯(lián)合移植組(OA group):分別移植左心耳組織和大網(wǎng)膜。手術(shù)4周后,超聲心動圖評價心室重構(gòu)和心臟功能,Masson染色檢測心肌梗死面積和疤痕厚度,免疫組化評價心耳存活、血管化,蛋白免疫印跡法檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、金屬蛋白酶(MM

3、P-2/MMP-9)及其抑制物(TIMP-3)蛋白表達(dá),明膠酶譜法評價金屬蛋白酶活性,酶聯(lián)免疫吸附法檢測內(nèi)皮素-1(ET-1)蛋白水平,程序性電刺激評價心律失常易感性(Arrhythmia Score)。
　　 結(jié)果:
　　 4周后,僅在OA組觀察到左心耳組織部分存活。Masson染色顯示各組心肌梗死面積無顯著差異(P＞0.05),OA組疤痕厚度顯著增厚(391±31μm vs329±33μm,P＜0.05)；超聲心動圖

4、結(jié)果證實(shí)OA組心臟功能顯著改善(LVEF:57.9±5.8％vs47.5±4.5％,P＜0.05 and INFS:25.2±3.6％vs20.7±2.0％,P＜0.05)；免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示A組以及OA組梗死周邊區(qū)血管密度明顯增加(49/0.2mm2 vs33/0.2mm2,P＜0.01 and48/0.2mm2 vs33/0.2mm2,P＜0.01)；蛋白免疫印跡顯示MMP-2/MMP-9在OA組表達(dá)下降,TIMP-3表達(dá)無顯著差

5、異,VEGF在O組以及OA組表達(dá)增加:明膠酶譜法證實(shí)OA組金屬蛋白酶活性下降(MMP-2:68％P=0.002 and MMP-9:64％P=0.016),；酶聯(lián)免疫吸附法證實(shí)ET-1蛋白水平在O組以及OA組顯著下調(diào)(4.69±0.47 pg/mg vs5.95±0.55 pg/mg.P＜0.01 and4.79±0.57 pg/mg vs5.95±0.55 pg/mg；P＜0.05)；程序性電刺激顯示單純大網(wǎng)膜以及聯(lián)合移植大鼠心律失常

6、易感性顯著下降(0.46±0.31 vs2.10±0.60,P＜0.05 and0.50±0.34 vs2.10±0.60,P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 大網(wǎng)膜能通過再血管化使移植的心房組織部分存活,聯(lián)合移植的方法能通過降低室壁應(yīng)力、改善膠原重構(gòu)和增加血供等途徑改善慢性心肌梗死大鼠心臟功能,大網(wǎng)膜移植能有效的降低慢性心肌梗死大鼠心律失常易感性。
　　 第二部分:大網(wǎng)膜移植治療慢性心肌梗死大鼠室性心律失常的

7、實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:
　　 心臟神經(jīng)重構(gòu)是心肌梗死后心律失常的重要發(fā)病機(jī)制,研究組前期的動物實(shí)驗(yàn)提示大網(wǎng)膜以及大網(wǎng)膜聯(lián)合移植降低了慢性心肌梗死大鼠心律失常的易感性,本研究將證實(shí)大網(wǎng)膜移植是否通過逆轉(zhuǎn)心臟神經(jīng)重構(gòu)降低心律失常易感性。
　　 方法:
　　 Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(Sham group,n=20),第一次開胸穿線不結(jié)扎,3周后僅再次開胸；單純心肌梗死組(MI g

8、roup,n=20),第一次通過前降支結(jié)扎法建立心肌梗死模型,3周后儀再次開胸,不移植大網(wǎng)膜；大網(wǎng)膜移植組(MI+O group,n=20),第一次通過前降支結(jié)扎法建立心肌梗死模型,3周后再次開胸并移植大網(wǎng)膜。4周后分別采用電生理方法評價各組大鼠的電生理特性,免疫組織化學(xué)方法檢測心臟神經(jīng)分布及密度,蛋白免疫印跡檢測連接蛋白43(Connexin43)、神經(jīng)生長因子(NGF)的表達(dá),酶聯(lián)免疫吸附法檢測心肌組織內(nèi)皮素-1(ET-1)的表達(dá)。

9、
　　 結(jié)果:
　　 與MI組相比,MI+O組大鼠心律失常易感性顯著下降(評分:0.9±0.2 vs3.5±1.2,p＜0.05),電傳導(dǎo)阻滯得到顯著改善(自發(fā)電位:3.4±0.3mv vs1.5±0.2mv,p＜0.05；同步閾值:2.2±0.2mv vs5.5±0.3mv,p＜0.05)；免疫組織化學(xué)顯示大網(wǎng)膜移植顯著降低了心肌梗死周邊區(qū)新生神經(jīng)以及交感神經(jīng)密度(GAP43:768.6±144.1μm2/mm2vs1

10、388.4±244.9μm2/mm2,p＜0.05；TH:1018.5.±124.7μm2/mm2 vs1552.4±270.3μm2/mm2,p＜0.05)；蛋白免疫印跡結(jié)果表明MI+O組NGF表達(dá)下調(diào)而Connexin43的表達(dá)上調(diào),酶聯(lián)免疫吸附法顯示MI+O組ET-1的表達(dá)下調(diào)(4.5±0.3pg/mg vs5.8±0.4 pg/mg,p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 心肌梗死后在其周邊區(qū)存在以交感神經(jīng)過度再生

11、的重構(gòu)現(xiàn)象,大網(wǎng)膜移植能顯著逆轉(zhuǎn)心肌梗死后的心臟神經(jīng)重構(gòu),并降低低慢性心肌梗死大鼠心律失常易感性。
　　 第三部分):SinoSCORE與EuroSCORE預(yù)測非體外循環(huán)冠狀動脈旁路移植術(shù)住院死亡率的對比研究
　　 目的:
　　 術(shù)前風(fēng)險評估模型對臨床醫(yī)生以及衛(wèi)生行政部門都具有重要的指導(dǎo)意義,本課題組前期研究證實(shí)目前的“金標(biāo)準(zhǔn)”歐洲心臟手術(shù)風(fēng)險評估模型(EuroSCORE)顯著高估我國冠狀動脈旁路移植術(shù)的死亡率,

12、因此根據(jù)中國心臟外科數(shù)據(jù)庫構(gòu)建了適合我國國情的中國冠心病手術(shù)風(fēng)險評估模型(SinoSCORE)。本研究旨在驗(yàn)證SinoSCORE對阜外醫(yī)院單中心單純非體外循環(huán)冠狀動脈旁路移植手術(shù)的預(yù)測價值。
　　 方法:
　　 自2004年1月至2008年12月,共1966例患者在阜外醫(yī)院行單純非體外循環(huán)冠狀動脈旁路移植術(shù),收集這些患者的人口學(xué)資料、術(shù)前危險因素、術(shù)中危險因素、住院死亡率、術(shù)后并發(fā)癥等信息,根據(jù)SinoSCORE和Eur

13、oSCORE評分法則分別評分,終點(diǎn)事件定義為住院死亡。采用應(yīng)用接受者工作特征曲線(ROC)下面積(AUC)衡量模型的區(qū)分度,采用單因素logistic回歸及Hosmer-Lemeshow(HL)卡方檢驗(yàn)考察模型的校準(zhǔn)度。
　　 結(jié)果:
　　 患者平均年齡為61.6±9.3歲,其中80.5％為男性患者。住院死亡22例,總體死亡率為1.1％。EuroSCORE預(yù)測住院死亡率為2.9±2.2％,SinoSCORE則為1.6±3

14、.7％。SinoSCORE和EuroSCORE的AUC分別為0.76(95％置信區(qū)間,0.66-0.87,P＜0.01)和0.68(95％置信區(qū)間,0.52-0.84,P＜0.05)；HL卡方檢驗(yàn)P值分別為0.78和0.76。
　　 結(jié)論:
　　 該單中心數(shù)據(jù)證實(shí),SinoSCORE比EuroSCORE能更準(zhǔn)確的預(yù)測非體外循環(huán)冠狀動脈旁路移植術(shù)的住院死亡率。SinoSCORE為我國非體外循環(huán)冠狀動脈旁路移植術(shù)的術(shù)前風(fēng)險評