全反式維甲酸對(duì)大鼠腸系膜動(dòng)脈的舒張作用及機(jī)制研究.pdf

1、全反式維甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）是維生素A在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物。既往研究表明，ATRA具有誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞分化，抑制平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，抑制炎癥的作用。在血管內(nèi)皮細(xì)胞上，ATRA同其他維甲酸類物質(zhì)一樣，具有眾多的作用，包括：調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)；促進(jìn)血管活性產(chǎn)物如一氧化氮、前列腺素等的產(chǎn)生；誘導(dǎo)尿激酶型纖維蛋白酶原激活物，組織型纖溶酶原激活物等抗血栓基因的表達(dá)。在大鼠胸主動(dòng)脈上，ATRA能通過促進(jìn)乙酰

2、膽堿的合成而提高血管舒張反應(yīng)性。有研究顯示，對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠腹腔灌注ATRA一個(gè)月，能降低大鼠動(dòng)脈血壓。而血管組織作為調(diào)控血壓的一個(gè)重要靶器官，我們推測(cè)ATRA可能直接影響血管的舒縮功能。
　　目的：觀察ATRA對(duì)離體大鼠腸系膜動(dòng)脈環(huán)舒縮功能的直接作用，并初步探討其機(jī)制。
　　方法：分離 SD大鼠腸系膜三級(jí)動(dòng)脈，采用多通道微血管張力測(cè)定儀620M記錄血管張力的變化，觀察 ATRA及維甲酸類藥物對(duì)大鼠離體腸系膜動(dòng)脈環(huán)舒縮反應(yīng)

3、的作用。觀察不同類型一氧化氮阻斷劑：非特異性一氧化氮阻斷劑L-NMMA、內(nèi)皮型一氧化氮阻斷劑L-NAME及損傷型一氧化氮阻斷劑SMT，可溶性鳥苷酸環(huán)化酶特異性抑制劑ODQ，各類鉀離子通道，包括電壓依賴性鉀離子通道(KV)阻斷劑4-氨基吡啶(4-AP)、ATP敏感性鉀通道(KATP)阻斷劑格列苯脲(glibenclamide)、鈣激活型鉀離子通道(KCa)阻斷劑蜂毒明肽(apamin)加蝎毒素(charybdotoxin)以及維甲酸類抑制

4、劑對(duì)ATRA調(diào)節(jié)血管反應(yīng)性的影響。利用一氧化氮熒光探針(DAF-2DA探針)觀察血管組織在ATRA預(yù)先作用下一氧化氮的生成量。利用 cGMP試劑盒檢測(cè)內(nèi)皮完好及內(nèi)皮缺失血管組織在ATRA預(yù)先作用下cGMP的生成量。
　　結(jié)果：
　　第一部分 ATRA對(duì)腸系膜動(dòng)脈環(huán)張力的影響：（1）ATRA（10-8-3×10-6mol/L）能呈濃度依賴性地舒張由PhE（10-5mol/L）預(yù)收縮的腸系膜動(dòng)脈環(huán)，最大舒張率為(65.5±10.

5、9)％；（2）通過去除血管環(huán)內(nèi)皮層，則能消除 ATRA舒張血管的特性，最大舒張率為(17.1±6.7)%。結(jié)果說明：ATRA具有濃度依賴性地舒張血管血管的特性；該作用具有內(nèi)皮依賴性。
　　第二部分在內(nèi)皮完整條件下，ATRA舒張血管與NO-cGMP的關(guān)系：（1）在內(nèi)皮完整的情況下，L-NMMA（10-5mol/L），L-NAME（10-4mol/L）和ODQ（10-5mol/L）能有效抑制 ATRA的濃度依賴性舒張曲線最大舒張率分別

6、為(21.5±8.3)%，(19.6±7.8)%和(20.6±11.3)%；（2）在去內(nèi)皮和內(nèi)皮完整血管組織組，預(yù)先用ATRA（10-6mol/L）處理，cGMP試劑盒檢測(cè)發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮完整組cGMP含量遠(yuǎn)大于去內(nèi)皮組，利用 L-NAME（10-4mol/L）預(yù)先分別作用，發(fā)現(xiàn)L-NAME能有效抑制內(nèi)皮完整組cGMP的生成；（3）利用DAF-2DA熒光探針檢測(cè)，發(fā)現(xiàn) ATRA（10-6mol/L）處理后血管組織，45分鐘內(nèi)內(nèi)一氧化氮生成明顯增

7、多，呈時(shí)間依賴性。結(jié)果說明：ATRA能快速引起血管內(nèi)皮產(chǎn)生NO，進(jìn)而引起下游cGMP生成增加，該作用與ATRA舒張血管關(guān)系密切。
　　第三部分鉀離子通道在ATRA舒張血管中的作用：利用鉀離子通道阻斷劑預(yù)先孵育，發(fā)現(xiàn)4-氨基吡啶和格列苯脲不能抑制ATRA舒張血管濃度依賴性曲線，而小電導(dǎo)鈣激活型鉀離子通道阻斷劑蜂毒加上中電導(dǎo)鈣激活型鉀離子通道阻斷劑蝎毒素則能有效抑制 ATRA的舒張血管作用，最大舒張率為(22.4±7.1)%。結(jié)果表明

8、：鈣激活型鉀離子通道的激活參與了ATRA對(duì)血管的舒張作用。
　　第四部分維甲酸受體在ATRA舒張血管的作用：RAR受體激動(dòng)劑(CH55 and TTNPB)和RXR受體激動(dòng)劑(LG1069 and SR11237)分別能呈濃度依賴性地舒張由 PhE預(yù)收縮的腸系膜動(dòng)脈環(huán)；RAR(BMS493)和RXR受體抑制劑(UVI3003)能有效抑制ATRA舒張血管作用，兩者共同作用抑制效果更為明顯。結(jié)果表明：ATRA舒張血管具有RAR和RXR