藻藍(lán)蛋白聯(lián)合全反式維甲酸抗腫瘤分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究藻藍(lán)蛋白(C-phycocyanin，C-PC)和全反式維甲酸(all-transretinoic acid，ATRA)單獨(dú)及聯(lián)合用藥對(duì)腫瘤細(xì)胞體內(nèi)外生長的影響，并對(duì)其抗腫瘤作用機(jī)制進(jìn)行探討。
　　方法:MTT法檢測ATRA和C-PC單獨(dú)及聯(lián)合用藥對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞生長的影響，TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡情況，免疫組化和Westren blot法檢測Bcl-2和Caspase-3蛋白的表達(dá)，原位雜交和免疫

2、熒光法檢測CDK-4 mRNA和Cyclin D1蛋白水平，RT-PCR法檢測CD59基因的表達(dá)。然后將HeLa細(xì)胞注射入NU/NU裸鼠左側(cè)腋窩皮下構(gòu)建荷瘤小鼠模型，經(jīng)藥物干預(yù)后檢測瘤塊和脾臟重量，特異玫瑰花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)和MTT法檢測T淋巴細(xì)胞和脾臟細(xì)胞的活性，ELISA法檢測脾臟細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF的含量，免疫組化和免疫熒光法檢測瘤塊內(nèi)Bcl-2和Cyclin D1基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:ATRA和C-PC在體內(nèi)和體外均具有抑制

3、腫瘤細(xì)胞生長的作用，當(dāng)達(dá)到相同的抑制率時(shí)，聯(lián)合C-PC使用可以顯著降低ATRA的使用劑量從而達(dá)到降低毒副作用的目的。兩種藥物聯(lián)合用藥處于中高抑制率時(shí)為協(xié)同作用。聯(lián)合用藥可以顯著下調(diào)抗凋亡Bcl-2和增加促凋亡Caspase-3蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞周期相關(guān)CDK-4和Cyclin D1蛋白的表達(dá)，抑制補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD59的表達(dá)。ATRA單獨(dú)使用會(huì)對(duì)脾臟和T細(xì)胞的活性產(chǎn)生影響，而兩者聯(lián)合用藥則對(duì)脾臟生長和T細(xì)胞活性具有促進(jìn)作用，并可顯著促進(jìn)