全反式維甲酸對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化兔內(nèi)皮功能調(diào)節(jié)的探究.pdf

1、背景：眾所周知，動(dòng)脈粥樣硬化是一種發(fā)生在動(dòng)脈內(nèi)壁的慢性炎癥性疾病，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。越來越多的證據(jù)表明，血管內(nèi)皮功能障礙與心血管事件密切相關(guān)。因此，正確認(rèn)識(shí)影響血管的收縮和舒張功能的因子失衡，對(duì)于了解并干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病起重要作用。內(nèi)皮細(xì)胞可以分泌調(diào)節(jié)因子，包括一氧化氮（NO）和內(nèi)皮素（ET），從而調(diào)節(jié)血管松弛和收縮。全反式維甲酸（Retinoic Acid，ATRA）是維生素A的天然衍生物，可通過調(diào)節(jié)炎癥因子來改善動(dòng)脈粥樣硬

2、化。然而，關(guān)于全反式維甲酸對(duì)動(dòng)脈內(nèi)皮功能的作用的研究較少見。本文，我們通過研究在動(dòng)脈粥樣硬化兔中，全反式維甲酸對(duì)血管內(nèi)皮產(chǎn)生的內(nèi)皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）水平的影響來探討全反式維甲酸對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制。
　　目的：本研究選擇普通新西蘭白兔作為動(dòng)物模型，觀察全反式維甲酸對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化兔血管內(nèi)皮的內(nèi)皮素-1和一氧化氮的影響，從而探討全反式維甲酸對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制。
　　方法：24只普通新西蘭白兔適應(yīng)性飼養(yǎng)

3、一周后，隨機(jī)分為三組（n=8）：A為正常對(duì)照組，B為高脂組，C為ATRA干預(yù)組。正常對(duì)照組予以普通飼料喂養(yǎng)，高脂組給予高脂飼料喂養(yǎng)，ATRA干預(yù)組為高脂飼料喂養(yǎng)，高脂飲食4周后，開始加ATRA（10mg/(kg?d)）灌胃干預(yù)，并繼續(xù)予以高脂飲食喂養(yǎng)。12周后，采集血標(biāo)本和胸主動(dòng)脈標(biāo)本，觀察主動(dòng)脈斑塊形成情況，測(cè)定兔的血脂水平、動(dòng)脈內(nèi)膜通透性、血液eNOS活性、內(nèi)皮素（ET-1）、血漿一氧化氮（NO）含量；采用Western blot檢

4、測(cè)主動(dòng)脈中 ET-1，內(nèi)皮一氧化氮合酶（eNOS）和 eNOS磷酸化的產(chǎn)物（p-eNOS）的水平。
　　結(jié)果：1. ATRA減輕動(dòng)脈粥樣硬化兔血管內(nèi)壁斑塊形成：油紅 O染色肉眼可見，正常對(duì)照組，血管內(nèi)壁光滑，基本無斑塊形成。高脂組內(nèi)壁可見明顯大面積斑塊形成，凹凸不平。ATRA干預(yù)組主動(dòng)脈內(nèi)壁有斑塊形成，與高脂組相比明顯較少。HE染色后，光鏡下可見正常組動(dòng)脈壁內(nèi)膜光滑連續(xù)，無內(nèi)膜增厚，平滑肌細(xì)胞排列整齊，彈性纖維稍紊亂。與正常組相比

5、，高脂組動(dòng)脈壁內(nèi)膜顯著增厚，彈力板多處斷裂，可見粥樣斑塊大量形成，斑塊中可見炎性細(xì)胞、泡沫細(xì)胞。ATRA干預(yù)組在藥物干預(yù)后，其動(dòng)脈壁內(nèi)膜可見少量斑塊形成，與高脂組相比，脂肪細(xì)胞和炎性細(xì)胞明顯減少。
　　2. ATRA降低動(dòng)脈粥樣硬化兔的血脂水平：由于脂質(zhì)水平與動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程關(guān)系密切，我們檢測(cè)了各組的膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白。與正常組相比較，高脂組的膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白明顯增高(P<0.05)，高密

6、度脂蛋白降低(P<0.05)。而ATRA干預(yù)組的膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白均比高脂組減低，高密度脂蛋白較高(P<0.05)。
　　3. ATRA降低動(dòng)脈粥樣硬化兔的動(dòng)脈內(nèi)皮通透性：在熒光顯微鏡下，可以觀察到熒光染料在對(duì)照組中幾乎沒有穿透，但滲透高脂組動(dòng)脈壁的全層，ATRA干預(yù)組中熒光染料的穿透率顯著低于高脂組，但比對(duì)照組增加。
　　4. ATRA影響動(dòng)脈粥樣硬化兔主動(dòng)脈中ET-1，eNOS和p-eNOS的表達(dá)：Weste

7、rn blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比較，高脂組兔動(dòng)脈組織中ET-1的表達(dá)明顯升高，而ATRA干預(yù)組的 ET-1表達(dá)量介于對(duì)照組和高脂組之間。此外，關(guān)于 eNOS磷酸化的產(chǎn)物Ser-1177（p-eNOS）的水平，p-eNOS在高脂組中的表達(dá)低于對(duì)照組，在用ATRA干預(yù)之后，其表達(dá)量明顯增加。而ATRA的干預(yù)對(duì)eNOS的表達(dá)并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5. ATRA對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化兔血中eNOS活性和ET-1、NO水平的影響：結(jié)果表明，高脂

8、組NO含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05），ATRA處理后eNOS活性和NO含量顯著升高（P<0.05）。 ET-1的檢測(cè)結(jié)果與NO的水平相反，ATRA組的ET-1表達(dá)明顯低于高脂組（P<0.05）。
　　結(jié)論：NO和ET之間的平衡調(diào)節(jié)是預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)重要途徑。在本實(shí)驗(yàn)中顯示，ATRA可以減少血漿中ET-1的含量，通過增加eNOS磷酸化增加NO含量，并通過調(diào)節(jié)兩者之間的平衡，從而改善血管松弛，減輕動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成。