大鼠器官型腦片的培養(yǎng).pdf

1、目的：建立大鼠正常器官型培養(yǎng)腦片模型，并對(duì)器官型腦片中的大錐體細(xì)胞進(jìn)行鑒定。器官型腦片培養(yǎng)成功后，可在此基礎(chǔ)上建立各種疾病的器官型腦片模型，探討疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制及規(guī)律。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用millicell-CM insert微孔膜插入式培養(yǎng)技術(shù)以及由最小培養(yǎng)基MEM，馬血清，Hanks’液組成的培養(yǎng)液成功培養(yǎng)了大鼠器官型腦片，并用抗非磷酸化神經(jīng)微絲單克隆抗體（SMI-32單克隆抗體）進(jìn)行免疫組化染色，對(duì)器官型腦片和在體腦

2、組織的大錐體細(xì)胞進(jìn)行鑒定，根據(jù)在體腦皮層的大錐體細(xì)胞對(duì)器官型腦片的大錐體細(xì)胞進(jìn)行定位及形態(tài)比較，在200×鏡下測(cè)定3個(gè)隨機(jī)視野中5mm×5mm目鏡測(cè)微尺面積下的SMI-32陽(yáng)性大錐體細(xì)胞的數(shù)目，對(duì)培養(yǎng)兩周、三周、四周的腦片之間大錐體細(xì)胞計(jì)數(shù)并比較。
　　 結(jié)果
　　 1 大鼠器官型培養(yǎng)腦片存活率達(dá)80％以上，可存活一個(gè)月以上。
　　 2 在體大腦皮層內(nèi)，第Ⅴ層細(xì)胞為大錐體細(xì)胞層，細(xì)胞胞體呈現(xiàn)多角形或者橢圓形，胞漿

3、著色淺，有的呈空泡狀，樹突或不明顯，軸突較長(zhǎng)，伸向皮層。
　　 3 培養(yǎng)腦片中，按照在體皮層大椎體細(xì)胞所分布的位置，可見在大腦皮層深部，第Ⅴ層細(xì)胞呈錐體形或者多角形，胞體直徑25～50μm，每個(gè)細(xì)胞的胞體顏色均一，胞漿著色深，樹突明顯，都有一個(gè)長(zhǎng)的軸突伸向皮層，軸突較長(zhǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的橫向突起增長(zhǎng)變多。
　　 4培養(yǎng)2、3、4周的腦片中的大錐體細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為28.50±4.34、27.83±4.40、27.6

4、7±3.55，各時(shí)點(diǎn)皮層錐體細(xì)胞計(jì)數(shù)無顯著差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用millicell-CM insert微孔膜插入式培養(yǎng)技術(shù)以及由最小培養(yǎng)基MEM，馬血清，Hanks’液組成的培養(yǎng)液成功培養(yǎng)了大鼠器官型腦片，摸索并明確了其生長(zhǎng)過程中對(duì)溫度、培養(yǎng)液酸堿度、糖含量及氧氣濃度的要求，最佳培養(yǎng)環(huán)境條件為：37℃，培養(yǎng)液PH值為7.2-7.4，糖含量27.76g/L，氣體配比為5％CO2+95％空氣，濕度為99％。培