器官型腦片培養(yǎng)OGD復氧模型中丁苯酞對于bcl-2-bax及bim蛋白的調節(jié)作用.pdf

1、目的:建立大腦皮層的器官型腦片氧糖剝奪模型(OxygenandGlucoseDeprivation，OGD)，觀察OGD復氧模型中丁苯酞(NBP)對細胞凋亡中bcl-2、bax及bim蛋白的調節(jié)作用。
　　 方法:用生后7天的SD(SpragueDawley)乳大鼠，制備大腦皮層運動區(qū)的器官型腦片，用膜插件的方法進行體外培養(yǎng)，觀察其形態(tài)。2周后，將腦片隨機分為對照組（C組）、模型組（M組）、溶劑對照組（MT組）和實驗組（T10組

2、），每組九片，更換含有Propidiumiodide（PI，1μg/ml）的培養(yǎng)液，孵育20min，倒置熒光顯微鏡下拍照（4X，曝光時間1.038ms，靈敏度ISO1600），后模型組、溶劑對照組和實驗組采用厭氧罐氧剝奪，更換無糖培養(yǎng)液（含PI）的方式，進行OGD干預30min，之后更換正常糖含量培養(yǎng)液，溶劑對照組更換同實驗組等量溶劑(DMSO)的正常培養(yǎng)液(含PI)，實驗組更換含NBP(10μM)的正常培養(yǎng)液（含PI），對照組與實驗組

3、同一時間更換兩次正常培養(yǎng)液。分別在干預前和恢復正常條件后不同時間點(1h、24h、72h)，觀察PI染色。另外，對照組、模型組和實驗組，重復上述干預（培養(yǎng)液不添加PI），復氧6小時后用戊二醛固定，并做石蠟切片，進行HE染色及對各組進行bcl-2、bax、bim蛋白的免疫組化染色。
　　 結果:
　　 1體外培養(yǎng)的腦片存活良好，未見明顯的壞死區(qū)域。2周的腦片，進行HE染色，可見正常的細胞結構。
　　 2PI染色可見

4、對照組在不同的時間點熒光強度并未發(fā)生明顯變化（P＞0.05），模型組和溶劑對照組可見熒光強度在OGD復氧1h后有明顯增強，之后在24h、72h逐漸增強。兩組進行各時間點比較其熒光強度未見明顯差異(P＞0.05)。
　　 3實驗組熒光強度也呈現(xiàn)逐漸增強趨勢，但與模型組比較，在24h、72h其熒光強度均低于模型組。
　　 4免疫組化染色可見對照組、模型組和實驗組處理后6小時的石蠟切片中。bcl-2蛋白:模型組和實驗組陽性細胞

5、數(shù)均增多，實驗組增多更明顯，三組差異均具有統(tǒng)計學意義;bax蛋白:模型組和實驗組陽性細胞數(shù)均增多，模型組增多更明顯，三組之間差異均有統(tǒng)計學意義;bim蛋白:模型組和實驗組陽性細胞數(shù)均增多，模型組增多更明顯，三組之間差異均有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:
　　 1出生后7天的SD乳鼠可以作為體外腦片培養(yǎng)的腦組織供體，并且可以以此為平臺，對腦細胞進行不同條件的刺激來研究神經細胞的不同反應;
　　 2OGD模型可以誘導腦片