α晶體蛋白與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞膜結合的靶蛋白的探索研究.pdf

1、目的:通過研究外源性α晶狀體蛋白與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的結合部位并探索與其作用的靶蛋白，初步探討α晶狀體蛋白促進RGCs存活及軸突再生的分子機制，為視神經(jīng)損傷后的臨床治療和研究提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、外源性α晶體蛋白與大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞結合的定位研究：通過蛋白的生物素化技術對外源性的α晶狀體蛋白進行生物素標記后與RGCs孵育，再用免疫組織化學技術研究外源性α晶狀體蛋白與RGCs的結合部位；
　　2、外源性α晶

2、體蛋白與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞膜受體integrinα6作用關系的研究：通過受體結合位點封閉的原理、免疫組織化學技術、蛋白質相互作用Pull-Down技術及免疫印跡實驗，間接和直接驗證外源性α晶狀體蛋白是否和RGC-5膜上受體integrinα6有作用關系；
　　3、應用SDS-GAGE電泳及質譜的方法對用Pull-Down技術捕獲的蛋白進行分析。結果:1.外源性α晶狀體蛋白結合RGCs的胞膜上；
　　2、α晶狀體蛋白與視網(wǎng)膜神經(jīng)

3、節(jié)細胞膜受體integrinα6無作用關系。
　　3、SDS-GAGE電泳凝膠上有一個50KD左右的條帶,將其質譜分析，結果中谷胱甘肽S-轉移酶的評分大于系統(tǒng)顯著性評價的標準。
　　結論:
　　1.外源性α晶狀體蛋白是通過結合于RGCs的胞膜上發(fā)揮促進其存活及軸突生長作用的；
　　2.盡管層粘連蛋白-1通過作用于RGCs上integrinα6有明顯的促進軸突生長的作用，且α晶狀體蛋白可以通過作用于晶體上皮細胞上的