TLR3與胎盤細(xì)胞凋亡在胎盤HBV感染及HBV宮內(nèi)感染中的作用.pdf

1、目的：
　　 ①了解HBsAg陽性孕婦胎盤細(xì)胞的凋亡情況。②探討TLR3及胎盤細(xì)胞凋亡與胎盤HBV感染的關(guān)系。③探討TLR3與胎盤細(xì)胞凋亡在HBV宮內(nèi)感染中的作用。
　　 方法：
　　 1.選擇2003年7月至2004年6月由太原市區(qū)各級醫(yī)院篩檢，于太原市傳染病醫(yī)院婦產(chǎn)科產(chǎn)前檢查并分娩的HBsAg陽性孕婦136例為研究對象，同期選擇于山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬臨床醫(yī)院產(chǎn)前檢查并分娩的無孕期感染史、無妊娠并發(fā)癥的正常孕婦

2、30例為對照。收集HBsAg陽性孕婦及正常孕婦分娩時(shí)的胎盤組織，采集HBsAg陽性孕婦肘靜脈血及其新生兒股靜脈血各2ml，同時(shí)收集研究對象的流行病學(xué)基線材料。進(jìn)行了下述研究：①采用ELISA法檢測血清HBsAg，熒光定量PCR法定量檢測血清HBVDNA；②采用免疫熒光雙標(biāo)記法檢測胎盤組織中HBsAg和TLR3；③采用Tunel法檢測胎盤細(xì)胞的凋亡情況。
　　 2.選擇2008年12月至2009年1月由太原市區(qū)各級醫(yī)院篩檢，于太原

3、市傳染病醫(yī)院婦產(chǎn)科產(chǎn)前檢查并分娩的檢測為HBV宮內(nèi)感染的HBsAg陽性孕婦20例，分別按1∶3和1∶2的比例匹配同期分娩的非宮內(nèi)感染孕婦60例及正常孕婦40例。無菌采集孕婦分娩時(shí)胎盤組織，提取總RNA，采集HBsAg陽性孕婦肘靜脈血及其新生兒股靜脈血各2ml。進(jìn)行了下述研究：①采用ELISA法檢測血清HBsAg，熒光定量PCR法定量檢測血清HBVDNA；②采用Real-timeRT-PCR檢測TLR3mRNA及caspase3mRNA的

4、表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 ①采用Tunel法檢測胎盤凋亡情況，比較各組凋亡指數(shù)：HBsAg陽性孕婦凋亡指數(shù)顯著高于正常孕婦(t=37.834，P＜0.001)，但各血清HBVDNA含量組凋亡指數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.727，p=0.487)；胎盤HBV感染組凋亡指數(shù)顯著低于胎盤非感染組(t=2.614，p=0.010)；TLR3陽性組與TLR3陰性組凋亡指數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(t=1.162，p=0.247)；HBV宮內(nèi)感染

5、組和非宮內(nèi)感染組的凋亡指數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-1.956，p=0.053)。
　　 ②采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測足月胎盤TLR3mRNA及caspase3mRNA的表達(dá)，比較各組差異。TLR3mRNA的相對表達(dá)量：HBsAg陽性孕婦組高于正常孕婦組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-21.714，P＜0.0001)，但是各血清HBVDNA含量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.727，P=0.487)；HBV宮內(nèi)感染組和非宮內(nèi)感染組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

6、(t=1.685，P=0.096)。caspase3mRNA的相對表達(dá)量：HBsAg陽性孕婦組高于正常孕婦組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-2.467，P=0.015)，但各血清HBVDNA含量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=1.151，P=0.322)；HBV宮內(nèi)感染組與非宮內(nèi)感染組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=1.826，P=0.072)。
　　 ③對足月胎盤TLR3mRNA及caspase3mRNA的相對表達(dá)量作相關(guān)性分析顯示：在正常孕婦組中，Casp

7、as3Ct/GAPDHCt值與TLR3_Ct/β-actinCt值呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.479，p=0.002)；而在HBsAg陽性孕婦組中未發(fā)現(xiàn)兩變量有相關(guān)性(r=0.106，p=0.351)，進(jìn)一步在宮內(nèi)感染組和非宮內(nèi)感染組中分別做兩變量的相關(guān)性分析，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=-0.152，p=0.512；r=0.162，p=0.221)。
　　 結(jié)論：
　　 ①正常孕婦足月胎盤凋亡指數(shù)和caspase3mRNA的相對表