胎盤Hofbauer細胞FcγRⅢ介導HBV宮內感染.pdf

1、目的:探討HBV感染孕產婦胎盤組織Hofbauer細胞表面FcγRⅢ的表達水平，探討絨毛Hofbauer細胞FcγRⅢ表達與宿主體內HBV復制水平的相互關系以及其在介導HBV垂直傳播中的作用。
　　方法:篩選58例HBV感染足月分娩產婦的和60例感染HBV的孕婦流產胎盤絨毛。以Ficoll-Hypaque分離HBV感染產婦的外周血PBMCs和其新生兒的臍血CBMCs，PCR法檢測足月分娩HBV感染產婦的外周血和其新生兒臍血HBV-

2、DNA的載量。以胰酶聯合EDTA消化液消化新鮮的絨毛組織，以RPMI1640完全培養(yǎng)液懸浮制備細胞懸液，分別采用Ficoll-Hypaque和Percoll密度梯度離心法分離Hofbauer細胞，以臺盼藍染色檢測分離純化的Hofbauer細胞的活度。取分離提純后的Hofbauer細胞懸液，以RPMI1640完全培養(yǎng)液調整純化后的細胞濃度為(1-2)×106/mL，以PCR法檢測Hofbauer細胞內HBV-DNA載量。取分離純化的Hof

3、bauer細胞懸液以Trizol進行總RNA的提取，逆轉錄以隨機引物合成cDNA，檢測Hofbauer細胞FcγRⅢ的mRNA表達，以lgcDNA/lgGAPDH的比值代表FcγRⅢmRNA的最終含量，對比分析FcγRⅢmRNA的表達和HBV-DNA載量間相互關系;HE染色和SP法免疫組織化學染色進一步檢測HBV感染孕婦絨毛Hofbauer細胞FcγRⅢ表達與HBV感染水平的關系，分析不同的HBV感染類型孕產婦組織Hofbauer細胞F

4、cγRⅢ表達水平。
　　結果:HBeAg(+)足月分娩產婦的PBMCs及其新生兒CBMCs內HBV-DNA檢出率和HBV病毒載量都高于HBeAg(-)者，差異有統計學意義(P＜0.05)。其中，PBMCs內高病毒載量組的新生兒血清和CBMCs內HBV-DNA檢出率均較高。在早期流產孕婦標本檢測發(fā)現HBeAg(+)孕婦流產絨毛Hofbauer細胞內HBV-DNA陽性率較高，達46.4％(13/28)，且陽性者病毒載量較高，與HBeA

5、g(-)者相比，HBeAg(+)孕婦流產絨毛Hofbauer細胞內HBV-DNA陽性檢出率較高，有統計學差異(P＜0.05)。以PCR法對Hofbauer細胞內HBV-DNA(+)進一步檢測發(fā)現CD16mRNA較正常者增加，與HBV-DNA(-)者相比，差異有統計學意義(P＜0.05)，且Hofbauer細胞CD16 mRNA表達與其HBV-DNA載量有較好的相關性（r=0.65，P＜0.05）。HBV-DNA(+)組Hofbauer細

6、胞內FcγRⅢ表達明顯強于HBV-DNA(-)組，經統計學分析差異有統計學意義(P＜0.05)。細胞免疫組化染色法結果顯示HBV感染孕婦和正常流產絨毛Hofbauer細胞內均見CD16表達，細胞胞膜和在細胞質可見棕色顆粒，其中HBV感染產婦絨毛中的Hofbauer細胞數量增加且CD16著色較正常對照明顯增強，同時HBV-DNA(+)者的Hofbauer細胞著色較HBV-DNA(-)者的Hofbauer細胞更明顯。HBV感染組胎盤Fcγ

7、RⅢ mRNA表達較正常組有所升高，差異統計學意義(P＜0.05)，其中宮內感染組的FcγRⅢ mRNA表達較非宮內感染組明顯增高，差異有統計學意義(P＜0.05)。
　　結論:Hofbauer細胞為胎盤的巨噬細胞，主要存在于絨毛間質中，Hofbauer細胞在抵抗病原微生物感染胎盤的同時，亦可受HBV侵染。Hofbauer細胞是否能被HBV感染與宿主HBeAg表達和HBV-DNA載量相關。FcγRⅢ是Hofbauer細胞的關鍵受體

8、，是細胞活化的重要標志。Hofbauer細胞表面FcγRⅢ的表達與宿主乙肝病毒的載量相關。SP法免疫組織化學染色顯示FcγRⅢ主要表達在Hofbauer細胞胞膜和胞質中，呈棕色顆粒其表達強弱與宿主體內病毒復制水平和HBV載量正相關。HBV感染Hofbauer細胞后，可激活細胞體內級聯信號傳導系統，使Hofbauer細胞內FcγRⅢ表達增強，FcγRⅢ與母體循環(huán)的HBsAg-抗HBsAg等免疫復合物結合引起細胞免疫或淋巴因子的轉錄，介導H