胎盤Hofbauer細(xì)胞FcγRⅢ介導(dǎo)HBV宮內(nèi)感染.pdf

1、目的:探討HBV感染孕產(chǎn)婦胎盤組織Hofbauer細(xì)胞表面FcγRⅢ的表達(dá)水平，探討絨毛Hofbauer細(xì)胞FcγRⅢ表達(dá)與宿主體內(nèi)HBV復(fù)制水平的相互關(guān)系以及其在介導(dǎo)HBV垂直傳播中的作用。
　　方法:篩選58例HBV感染足月分娩產(chǎn)婦的和60例感染HBV的孕婦流產(chǎn)胎盤絨毛。以Ficoll-Hypaque分離HBV感染產(chǎn)婦的外周血PBMCs和其新生兒的臍血CBMCs，PCR法檢測足月分娩HBV感染產(chǎn)婦的外周血和其新生兒臍血HBV-

2、DNA的載量。以胰酶聯(lián)合EDTA消化液消化新鮮的絨毛組織，以RPMI1640完全培養(yǎng)液懸浮制備細(xì)胞懸液，分別采用Ficoll-Hypaque和Percoll密度梯度離心法分離Hofbauer細(xì)胞，以臺盼藍(lán)染色檢測分離純化的Hofbauer細(xì)胞的活度。取分離提純后的Hofbauer細(xì)胞懸液，以RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整純化后的細(xì)胞濃度為(1-2)×106/mL，以PCR法檢測Hofbauer細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA載量。取分離純化的Hof

3、bauer細(xì)胞懸液以Trizol進(jìn)行總RNA的提取，逆轉(zhuǎn)錄以隨機(jī)引物合成cDNA，檢測Hofbauer細(xì)胞FcγRⅢ的mRNA表達(dá)，以lgcDNA/lgGAPDH的比值代表FcγRⅢmRNA的最終含量，對比分析FcγRⅢmRNA的表達(dá)和HBV-DNA載量間相互關(guān)系;HE染色和SP法免疫組織化學(xué)染色進(jìn)一步檢測HBV感染孕婦絨毛Hofbauer細(xì)胞FcγRⅢ表達(dá)與HBV感染水平的關(guān)系，分析不同的HBV感染類型孕產(chǎn)婦組織Hofbauer細(xì)胞F

4、cγRⅢ表達(dá)水平。
　　結(jié)果:HBeAg(+)足月分娩產(chǎn)婦的PBMCs及其新生兒CBMCs內(nèi)HBV-DNA檢出率和HBV病毒載量都高于HBeAg(-)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其中，PBMCs內(nèi)高病毒載量組的新生兒血清和CBMCs內(nèi)HBV-DNA檢出率均較高。在早期流產(chǎn)孕婦標(biāo)本檢測發(fā)現(xiàn)HBeAg(+)孕婦流產(chǎn)絨毛Hofbauer細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA陽性率較高，達(dá)46.4％(13/28)，且陽性者病毒載量較高，與HBeA

5、g(-)者相比，HBeAg(+)孕婦流產(chǎn)絨毛Hofbauer細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA陽性檢出率較高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。以PCR法對Hofbauer細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA(+)進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)CD16mRNA較正常者增加，與HBV-DNA(-)者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且Hofbauer細(xì)胞CD16 mRNA表達(dá)與其HBV-DNA載量有較好的相關(guān)性（r=0.65，P＜0.05）。HBV-DNA(+)組Hofbauer細(xì)

6、胞內(nèi)FcγRⅢ表達(dá)明顯強(qiáng)于HBV-DNA(-)組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。細(xì)胞免疫組化染色法結(jié)果顯示HBV感染孕婦和正常流產(chǎn)絨毛Hofbauer細(xì)胞內(nèi)均見CD16表達(dá)，細(xì)胞胞膜和在細(xì)胞質(zhì)可見棕色顆粒，其中HBV感染產(chǎn)婦絨毛中的Hofbauer細(xì)胞數(shù)量增加且CD16著色較正常對照明顯增強(qiáng)，同時(shí)HBV-DNA(+)者的Hofbauer細(xì)胞著色較HBV-DNA(-)者的Hofbauer細(xì)胞更明顯。HBV感染組胎盤Fcγ

7、RⅢ mRNA表達(dá)較正常組有所升高，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中宮內(nèi)感染組的FcγRⅢ mRNA表達(dá)較非宮內(nèi)感染組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:Hofbauer細(xì)胞為胎盤的巨噬細(xì)胞，主要存在于絨毛間質(zhì)中，Hofbauer細(xì)胞在抵抗病原微生物感染胎盤的同時(shí)，亦可受HBV侵染。Hofbauer細(xì)胞是否能被HBV感染與宿主HBeAg表達(dá)和HBV-DNA載量相關(guān)。FcγRⅢ是Hofbauer細(xì)胞的關(guān)鍵受體

8、，是細(xì)胞活化的重要標(biāo)志。Hofbauer細(xì)胞表面FcγRⅢ的表達(dá)與宿主乙肝病毒的載量相關(guān)。SP法免疫組織化學(xué)染色顯示FcγRⅢ主要表達(dá)在Hofbauer細(xì)胞胞膜和胞質(zhì)中，呈棕色顆粒其表達(dá)強(qiáng)弱與宿主體內(nèi)病毒復(fù)制水平和HBV載量正相關(guān)。HBV感染Hofbauer細(xì)胞后，可激活細(xì)胞體內(nèi)級聯(lián)信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，使Hofbauer細(xì)胞內(nèi)FcγRⅢ表達(dá)增強(qiáng)，F(xiàn)cγRⅢ與母體循環(huán)的HBsAg-抗HBsAg等免疫復(fù)合物結(jié)合引起細(xì)胞免疫或淋巴因子的轉(zhuǎn)錄，介導(dǎo)H