Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞免疫平衡在慢性HBV感染中的作用研究.pdf

1、目的：慢性乙型肝炎是我國常見的一種慢性傳染病,嚴(yán)重危害著國民的身體健康。機體的免疫功能在機體清除HBV過程中發(fā)揮著重要作用。目前Th17細(xì)胞與慢性乙型肝炎的關(guān)系還研究甚少,因此本研究以慢性HBV感染者為研究對象,以健康獻(xiàn)血者為正常對照(HC),研究慢性HBV感染者不同疾病狀態(tài)下,即無癥狀攜帶者(AsC)、慢性乙型肝炎輕中度(CHB-LM)、慢性重型乙型肝炎(CSHB),Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞為中心的免疫平衡狀態(tài)。
　　 方法

2、：⑴外周血Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞與機體的免疫或臨床狀態(tài)的相關(guān)性研究:選取無癥狀HBV攜帶者(AsC)、慢性乙型肝炎輕中度患者(CHB-LM)、慢性重型乙型肝炎(CSHB)、健康獻(xiàn)血員(HC)作為研究對象,經(jīng)知情同意后于分別抽取外周肝素抗凝血靜脈血,采用流式抗體進行細(xì)胞膜和胞內(nèi)染色技術(shù)運用流式細(xì)胞儀檢測外周血中Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞、Th1細(xì)胞的比例。分析各組之間細(xì)胞比例的差異是否有顯著性,分析各樣本Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞比例

3、是否與免疫細(xì)胞Th1細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞的比例是否具有相關(guān)性,及是否與HBV-DNA定量和肝功能(ALT、AST、TB、DB)具有相關(guān)性。⑵Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞和Th1細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子RORc、Foxp3和T-bet與機體免疫或臨床狀態(tài)的相關(guān)性研究:采用Real-timePCR方法檢測各組外周血細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子RORc、Foxp3和T-bet的mRNA表達(dá)水平。分析各組之間基因表達(dá)的差異是

4、否有顯著性。分析各樣本RORc、Foxp3和T-bet是否具有相關(guān)性,及是否與HBV-DNA定量和肝功能(ALT、AST、TB、DB)具有相關(guān)性。⑶外周血血漿中相關(guān)細(xì)胞因子與機體免疫或臨床狀態(tài)的相關(guān)性研究:采用ELISA方法檢測外周血血漿中IL-17、TGF-β、IFN-γ、IL-1β、IL-6及IL-21的濃度。分析各組之間各細(xì)胞因子濃度的差異是否有顯著性。分析各樣本各細(xì)胞因子是否具有相關(guān)性,及是否與HBV-DNA定量和肝功能(ALT

5、、AST、TB、DB)具有相關(guān)性。
　　 結(jié)果：①外周血Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞與機體的免疫或臨床狀態(tài)的相關(guān)性研究:CSHB患者外周血中Th17/CD4+T％在明顯高于與HC組、AsC組和CHB-LM,但是在HC組、AsC組和CHB-LM組間差異統(tǒng)計學(xué)無意義。檢測Treg/CD4+T％發(fā)現(xiàn),AsC組Treg細(xì)胞頻率明顯升高,與CSHB組相比統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),但與其他受試組無明顯差異。比較各組外周血Th1/CD4+T％

6、發(fā)現(xiàn),CSHB組和CHB-LM組的Th1細(xì)胞比例下降,以CSHB組下降更為明顯。CSHB組與HC組、CSHB組與AsC組相比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而與CHB-LM組無顯著性差異。慢性HBV感染可不影響外周血CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的比例,但對NK/lym％和DCs/lym％有影響。在CSHB組外周血NK細(xì)胞比例明顯下降,與HC組、AsC組和CHB-LM組相比,均有顯著性差異(P<0.01),同時CHB-LM與HC組之

7、間,CHB-LM與AsC組之間比較也有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。外周血DC/lym％以CHB-LM組最高,較HC組(P<0.05)與CSHB組(P<0.01)均有統(tǒng)計學(xué)差異。比較外周血中各細(xì)胞之間的相關(guān)性:Th17細(xì)胞比例與Treg細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),Th1細(xì)胞與Treg細(xì)胞呈正相關(guān)(P<0.05)。Th17/CD4+T％與TB呈顯著正相關(guān)(P<0.01),而Treg/CD4+T％與HBV-DNA定量呈正相關(guān)(P<0.0

8、1),兩者均未與ALT、AST有顯著相關(guān)性(P>0.05)。②Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞和Th1細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子RORc、Foxp3和T-bet的表達(dá)水平比較:CSHB組與AsC組、CHB-LM組相比RORc的表達(dá)水平明顯增高,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),但與HC組相比無差異。Treg細(xì)胞和Th1細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Foxp3和Tbet在各組間均無差異,但兩者之間存在正相關(guān)性(r=0.527,P<0.05)。Foxp3與A

9、ST呈負(fù)相關(guān)(r=-0.421,P<0.05)。③外周血血漿中相關(guān)細(xì)胞因子與機體免疫或臨床狀態(tài)的相關(guān)性研究:外周血血漿中TGF-β的檢測結(jié)果比較發(fā)現(xiàn),其在各組間無明顯差異。對IL-17檢測結(jié)果比較顯示,在AsC組與HC組,AsC組與CHB-LM組有顯著性差異(P<0.05)。比較各組IFN-γ在血漿中的水平發(fā)現(xiàn),CSHB組與HC組、AsC組存在差異(P<0.05)。IL-1β和IL-6在慢性HBV感染者外周血血漿中均明顯高于健康對照者,

10、其中HC組與CHB-LM組、CSHB組相比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),而AsC組與其他各組相比較均無差異(P>0.05)。CSHB組與HC組、CSHB組與CHB-LM組血漿中IL-21比較均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。IL-17與IL-21之間存在正相關(guān),IL-1β與IL-6之間存在正相關(guān)性。相關(guān)系數(shù)分別為0.262和0.253。IFN-γ與肝功能各項指標(biāo)(ALT、AST、TB、DB)均呈正相關(guān),與HBV-DNA之間不存在相關(guān)

11、性。IL-21與AST、TB、DB之間存在正相關(guān),與HBV-DNA之間存在負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論：慢性王HBV感染者外周血Th17細(xì)胞處于功能活躍狀態(tài),在一定程度上與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān),Treg細(xì)胞可導(dǎo)致慢性HBV感染后產(chǎn)生免疫耐受狀態(tài),與HBV-DNA定量呈負(fù)相關(guān)。外周血中Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞的比例負(fù)相關(guān),另外考慮到兩種細(xì)胞的產(chǎn)生機制,我們推斷兩者在機體內(nèi)可能處于一種免疫平衡狀態(tài)。Th17細(xì)胞分泌的IL-17與肝細(xì)胞的損