細(xì)胞自噬對(duì)HBV釋放及HBV感染細(xì)胞中干擾素形成的影響.pdf

1、細(xì)胞自噬(Autophagy)是真核生物用于清除胞內(nèi)聚集物、損傷細(xì)胞器而維持其穩(wěn)態(tài)平衡的一種溶酶體降解途徑。細(xì)胞自噬不僅在細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、成熟分化等過(guò)程中起著重要作用，且與多種疾病發(fā)生、病毒感染與免疫等密切相關(guān)。乙肝病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染引起的乙型肝炎嚴(yán)重影響著我國(guó)人口健康。HBV屬嗜肝DNA病毒科，其為一種囊膜病毒，病毒基因組DNA呈部分雙鏈。HBV出芽釋放時(shí)要經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體中間體，然后成熟的病毒粒

2、子再通過(guò)雙層膜結(jié)構(gòu)的包裹到達(dá)細(xì)胞表面，釋放到胞外。
　　 本文首先研究了細(xì)胞自噬對(duì)乙肝病毒釋放的影響，利用HBV表達(dá)質(zhì)粒瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染不同的肝癌細(xì)胞，通過(guò)透射電鏡和共聚焦熒光顯微鏡觀察了HBV感染的細(xì)胞引起的自噬，檢測(cè)了HBV表面蛋白HBs和細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白LC3在細(xì)胞中的共定位情況；藥物及siRNA處理使自噬體雙層膜減少時(shí)，胞外病毒蛋白HBs和HBV DNA顯著減少，而藥物及siRNA處理使自噬體雙層膜增加時(shí)，胞外病毒蛋白HB

3、s和HBV DNA顯著增加；檢測(cè)HBV感染的細(xì)胞抑制自噬體與溶酶體融合。這一結(jié)果表明細(xì)胞自噬形成的雙層膜有利于HBV的釋放，這為進(jìn)一步闡明HBV的釋放機(jī)理以及對(duì)HBV的預(yù)防和治療提供了新思路。天然免疫(innate immunity)是宿主抵抗病原微生物感染的第一道防線。細(xì)胞通過(guò)其表面或胞質(zhì)中的模式識(shí)別受體(pattern recognition receptor，PRR)來(lái)識(shí)別入侵的病原微生物，從而觸發(fā)天然免疫消滅或降低病原微生物的入

4、侵。干擾素具有抗病毒及免疫調(diào)節(jié)的雙重作用，是CHB的首選藥物之一。為了研究細(xì)胞自噬對(duì)乙肝病毒感染的I型干擾素的影響，通過(guò)敲降HBV感染的肝癌細(xì)胞中自噬關(guān)鍵因子Beclinl和Atg7，轉(zhuǎn)染自噬標(biāo)志融合蛋白GFP-LC3質(zhì)粒，檢測(cè)自噬小體形成，Real-Time PCR檢測(cè)干擾素表達(dá)及對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)。結(jié)果表明干擾Beclinl和Atg7均可抑制細(xì)胞自噬發(fā)生，抑制細(xì)胞自噬可降低HBV感染細(xì)胞系IFNβ和IFI27 mRNA的表達(dá)。這在一定