果蠅GABAB受體亞基C末端間的相互作用.pdf

1、γ-氨基丁酸(GABA)主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，它是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中十分重要的抑制性神經(jīng)遞質,它能夠通過與GABA受體相結合而行使其生物學上的功能。在神經(jīng)細胞中存在著兩種不同類型的GABA受體，分別是離子型γ-氨基丁酸受體—GABAA受體、GABAC受體和代謝型γ-氨基丁酸受體—GABAB受體（metabotropic GABA receptor type B，GABABR），GABABR屬于G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein coup

2、led receptor，GPCR) C家族，它可以介導緩慢和長時程的突觸傳遞抑制效應。GABABR受體在突觸前和突觸后都有分布，它在許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中具有重要的作用。它也被證明參與細胞的生存,指導神經(jīng)生長錐,神經(jīng)元遷移和定位?；谝陨显?，GABAB受體可以作為多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病和精神疾病治療的藥物靶點。
　　黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）,一般稱為“果蠅”(Fruit fly),在實驗遺傳學和發(fā)育

3、生物學中是一個非常理想的生物模型，近幾年以來果蠅在神經(jīng)科學中包括神經(jīng)藥理學中越來越多地被用作一個生物模型。因為相對于典型的哺乳動物模型果蠅具有很多的優(yōu)勢，例如利用果蠅我們可以獲的更好的可操作性的遺傳基因，在較低的成本下可以得到無數(shù)的實驗對象,而且人們對于果蠅的監(jiān)管限制非常少。利用果蠅作為生物模型，已經(jīng)證明，GABAB受體可能參與乙醇和?-羥丁酸在疼痛中的行為作用。除此以外，還有研究結果顯示，果蠅的GABAB受體在發(fā)育過程中可能發(fā)揮著重要

4、的作用，并且能夠參與嗅覺作用和調節(jié)生物周期節(jié)律。
　　然而，我們仍然應該認識到昆蟲與哺乳動物之間的本質性區(qū)別，只有更加清楚的了解果蠅GABAB受體（DGABABR）與哺乳動物GABAB受體之間的不同和造成這種不同的原因，我們才能更好的利用果蠅這個模型代替哺乳動物模型進行神經(jīng)科學包括神經(jīng)藥理學方面的研究。
　　在本研究中，首先以pRK質粒作為載體，分別構建含有果蠅GABAB受體兩個亞基DGABAB1（DGB1）和GABAB2（

5、DGB2）的質粒，其中GB1和GB2的N末端分別融合了HA和Flag標簽蛋白，標記為HA-DGABAB1R（HA-DGB1）和Flag-DGABAB2R（Flag-DGB2），然后把質粒以不同的組合方式轉入細胞中，利用Elisa技術分別檢測兩個受體亞基在細胞表面的表達情況。然后把果蠅GABAB受體的膜表達模式與大鼠GABAB受體的膜表達模式進行對比，發(fā)現(xiàn)果蠅GABAB受體的膜表達模式與大鼠的正好相反。然后我們對引起這種差別的原因進行了探

6、索，首先利用定點突變的方法尋找DGB2上的滯留序列，但是沒有找到。隨后我們利用終止突變的方法對DGB2 C末端與DGB1相互作用的關鍵性區(qū)域進行了探索，發(fā)現(xiàn)果蠅DGB2上的L777位點對于DGB1C末端與DGB2C末端之間的相互作用十分重要。
　　綜上所述，本研究主要是對果蠅GABAB受體兩個亞基DGB1與DGB2C末端的相互作用進行了研究，找出來DGB2C末端對于果蠅GABAB受體兩亞基C末端相互作用的關鍵性區(qū)域，并把2001年