中國人肝臟26S蛋白酶體亞基間的相互作用.pdf

1、泛素—蛋白酶體通路介導(dǎo)的細(xì)胞蛋白降解是一個(gè)復(fù)雜、縝密的過程，這種有高度選擇性的蛋白質(zhì)降解途徑在細(xì)胞周期、基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)、抗原遞呈等方面發(fā)揮重要的調(diào)控作用。但是到目前為止，對(duì)于泛素—蛋白酶體通路形成的分子機(jī)理及功能還不是很清楚。26S蛋白酶體是由多個(gè)亞基組成的復(fù)合體，這個(gè)復(fù)合體是兩部分組成，一部分是20S降解復(fù)合體，另一部分是20S降解復(fù)合體(CP)兩端的19S調(diào)節(jié)復(fù)合體(RP)。20S降解復(fù)合體是底物蛋白質(zhì)的水解中心，由7個(gè)α亞基和7個(gè)

2、β亞基，組成α1—7β1—7β1—7α1—7的桶狀結(jié)構(gòu)。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中還有3個(gè)可以被干擾素(IFNγ)誘導(dǎo)的β亞基，β1i，β2i，β5i，可以替換B1，β2，β5形成免疫蛋白酶體，主要在抗原遞呈中起作用。19S調(diào)節(jié)復(fù)合體至少有17個(gè)亞基組成，包含兩個(gè)亞結(jié)構(gòu)，分別是“蓋子”(lid)和“基底部”(base)?！吧w子”是由一些non—ATPase酶活性的亞基組成，“蓋子”能識(shí)別泛素化的底物，把底物帶入26S蛋白酶體中，并且能使泛素化的底

3、物去泛素，對(duì)泛素進(jìn)行再循環(huán)；“基底部”由6個(gè)具有ATPase酶活性的亞基和3個(gè)non—ATPase酶活性的亞基組成，主要功能是使底物蛋白去折疊和變性，使底物蛋白質(zhì)進(jìn)入20S降解復(fù)合體，進(jìn)行底物蛋白質(zhì)的水解。 肝臟是人體的第一大器官，是物質(zhì)代謝、能量轉(zhuǎn)換及供應(yīng)的樞紐，在人類生命活動(dòng)中占有重要地位。構(gòu)建人肝臟細(xì)胞的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)圖譜，對(duì)了解肝臟疾病的發(fā)生機(jī)理和治療有著重大的意義。 我們通過RT—PCR的方法，從人肝臟組織中獲得2

4、6S蛋白酶體亞基的全長(zhǎng)ORF，把這些亞基ORF分別克隆到酵母雙雜交的載體上，轉(zhuǎn)入酵母S．cerevisiaeAH109中進(jìn)行亞基間相互作用分析。我們總共得到了34個(gè)26S蛋白酶體亞基的全長(zhǎng)ORF，檢測(cè)了1156對(duì)26S蛋白酶體亞基間相互作用實(shí)驗(yàn)，觀察到112對(duì)陽性結(jié)果，其中有18對(duì)亞基間的相互作用是雙向的；同時(shí)我們使用GST—pull down的方法，驗(yàn)證了將近10％的酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果；還把表達(dá)不同的熒光標(biāo)記的相互作用亞基共轉(zhuǎn)染到He