量子點(diǎn)-CK19抗體熒光探針對(duì)乳腺癌細(xì)胞的免疫熒光標(biāo)記及毒性研究.pdf

1、免疫熒光標(biāo)記技術(shù)的飛速發(fā)展使其越來越多地應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中,例如,機(jī)熒光染料標(biāo)記法,該法已在標(biāo)記檢測(cè)分析中發(fā)揮著重要的作用,其原理就是通過熒光染料和抗體偶聯(lián)而成的熒光標(biāo)記物對(duì)目標(biāo)抗原進(jìn)行標(biāo)記,其本質(zhì)就是抗原抗體結(jié)合的反應(yīng)過程[1-3],同時(shí)運(yùn)用外來光源的激發(fā)使被標(biāo)記物發(fā)出肉眼可見的熒光或是紅外熒光。雖然該技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用,但在顯像能力,熒光強(qiáng)度,熒光穩(wěn)定性,熒光壽命,多色成像和生物毒性等方面還存在許多有待解決的問題。本文主要研究一種新

2、型的熒光標(biāo)記物,即由人工合成的半導(dǎo)體納米顆粒——量子點(diǎn),并將該熒光標(biāo)記物與抗體連接,形成新型的免疫熒光探針,實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性免疫熒光標(biāo)記。此量子點(diǎn)免疫熒光標(biāo)記技術(shù)能克服上述傳統(tǒng)的有機(jī)熒光染料標(biāo)記技術(shù)的諸多問題。此外,我們還探討了量子點(diǎn)免疫熒光探針對(duì)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的毒性作用,從而對(duì)該探針的生物相容性有了進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。
　　本論文主要研究?jī)?nèi)容和成果如下:
　　在水相中采用一步水熱法合成了CdTeS量子點(diǎn),該方法操作簡(jiǎn)單

3、方便,可重復(fù)性高,量子點(diǎn)產(chǎn)率高,成本相對(duì)較低且毒性較小。我們運(yùn)用調(diào)整反應(yīng)時(shí)間的方法實(shí)現(xiàn)了量子點(diǎn)的熒光發(fā)射峰從可見光到近紅外光范圍的有效調(diào)控性;通過增加一層CdS的外殼,不僅達(dá)到了提高CdTeS/CdS核殼結(jié)構(gòu)的熒光強(qiáng)度的目的,也增強(qiáng)了量子點(diǎn)本身的穩(wěn)定性及其在物理化學(xué)和生物特性等方面的穩(wěn)定性。
　　將制備的水溶性CdTeS量子點(diǎn)與CK19抗體共價(jià)結(jié)合得到量子點(diǎn)-CK19抗體免疫熒光探針。通過光譜分析得知共價(jià)結(jié)合后量子點(diǎn)-CK19抗體

4、探針基本保持了原有的CdTeS量子點(diǎn)的光學(xué)性質(zhì),激發(fā)光譜寬而連續(xù),發(fā)射光譜窄而對(duì)稱,在紫外光(波長(zhǎng)365nm)的激發(fā)下發(fā)出黃色熒光;同時(shí),CK19抗體原本的生物免疫活性也沒有受到影響,復(fù)合物探針的性質(zhì)穩(wěn)定。
　　通過直接免疫熒光法,利用合成的量子點(diǎn)-CK19抗體熒光探針對(duì)乳腺癌細(xì)胞株 MDA-MB-231進(jìn)行特異性熒光標(biāo)記。量子點(diǎn)-CK19抗體熒光探針能與抗原特異性的結(jié)合,熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡示在紫外光激發(fā)下,該探針能有效

5、對(duì)乳腺癌細(xì)胞株 MDA-MB-231進(jìn)行特異性熒光標(biāo)記,熒光主要位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜,熒光清晰明亮,持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)多次的高強(qiáng)度的激光照射,量子點(diǎn)發(fā)出的熒光沒有明顯的衰減,熒光壽命能持續(xù)14天以上。
　　探針與乳腺癌細(xì)胞株 MDA-MB-231作用后,分別采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖變化。結(jié)果證明在有效標(biāo)記濃度至八倍于有效標(biāo)記濃度的范圍內(nèi),該探針不會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;細(xì)胞增殖會(huì)隨著探針濃度的增加和作用時(shí)