介體條沙葉蟬內(nèi)小麥藍(lán)矮植原體的免疫熒光標(biāo)記.pdf

1、小麥藍(lán)矮病作為我國西北部地區(qū)小麥重要病害之一，嚴(yán)重影響小麥生產(chǎn)安全。小麥藍(lán)矮病的病原是小麥藍(lán)矮植原體，在田間小麥藍(lán)矮植原體由介體條沙葉蟬傳播危害。目前對于介體條沙葉蟬內(nèi)小麥藍(lán)矮植原體分布定位與帶毒量的檢測，主要采用了電子顯微鏡法。電子顯微鏡檢測存在的缺點主要有:制樣時間長、檢測設(shè)備昂貴，;不能在組織整體水平上對小麥藍(lán)矮植原體的定位進(jìn)行觀察。本實驗通過利用免疫熒光標(biāo)記的方法，首次標(biāo)記到了條沙葉蟬內(nèi)的小麥藍(lán)矮植原體。該方法可以快速簡便的對條

2、沙葉蟬內(nèi)小麥藍(lán)矮植原體的分布進(jìn)行定位觀察，明確了葉蟬內(nèi)的帶毒部位。本實驗為探索小麥藍(lán)矮植原體在條沙葉蟬內(nèi)的循回過程奠定了堅實的基礎(chǔ)。
　　從陜西韓城未發(fā)病小麥田塊捕捉條沙葉蟬，人工養(yǎng)殖后，收集若蟲飼養(yǎng)在無毒小麥上，繁殖得到無毒條沙葉蟬。把無毒條沙葉蟬轉(zhuǎn)移至感染小麥藍(lán)矮植原體的小麥病株上飼毒，在飼毒的不同時間，提取飼毒條沙葉蟬單頭DNA，使用巢式PCR擴(kuò)增的方法，檢測飼毒條沙葉蟬的獲毒率。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)條沙葉蟬飼毒7d時，條沙葉蟬的獲

3、毒率可以達(dá)到80％以上，條沙葉蟬可用于后續(xù)熒光標(biāo)記試驗。提取充分獲毒的條沙葉蟬總蛋白，與實驗室王強(qiáng)師兄制備的小麥藍(lán)矮植原體免疫膜蛋白(IMP)多克隆抗體進(jìn)行westernblot實驗。結(jié)果表明在飼毒條沙葉蟬在21Kda處有特異性條帶的存在，與預(yù)測的IMP蛋白大小相吻合，而健康條沙葉蟬未出現(xiàn)此條帶。實驗結(jié)果表明制備的IMP多克隆抗體特異性良好，可以用于后續(xù)熒光標(biāo)記實驗。
　　基于上述實驗結(jié)果，解剖獲毒7d條沙葉蟬，進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記實