坦布蘇病毒對(duì)櫻桃谷育成鴨的致病性研究.pdf

1、自2010年4月以來(lái)，我國(guó)多個(gè)地區(qū)肉鴨、蛋鴨養(yǎng)殖區(qū)暴發(fā)了一種以蛋鴨產(chǎn)蛋量下降和雛鴨神經(jīng)癥狀為特征的急性傳染病，研究表明該病是由一種新型黃病毒----坦布蘇病毒(Tembusu virus，簡(jiǎn)稱TMUV)感染引起的。TMUV感染發(fā)病迅速、發(fā)病率和死亡率較高，傳播速度快、流行范圍廣，嚴(yán)重威脅我國(guó)水禽產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究利用實(shí)驗(yàn)室分離的鴨源坦布蘇病毒，人工感染不同周齡育成鴨，研究不同周齡育成鴨對(duì)TMUV的易感性，旨在為

2、坦布蘇病毒的防控提供理論依據(jù)。
　　本研究將350只櫻桃谷后備鴨隨機(jī)分為14組，每組25只后備鴨，1~7組為試驗(yàn)組，分別于7、10、12、14、16、18和21周齡人工靜脈接種 TMUV AHQY株病毒液（1.265x105 ELD50），8~14組為對(duì)照組，分別于上述對(duì)應(yīng)時(shí)間接種相同劑量的無(wú)菌磷酸鹽緩沖液（PBS）。攻毒后連續(xù)觀察20d，每天采集泄殖腔和咽喉棉拭子樣品，觀察并記錄發(fā)病情況，分別于攻毒后第25、8、12、16和20

3、d隨機(jī)剖殺試驗(yàn)組和對(duì)照組鴨各4只，觀察并記錄感染鴨的臨床癥狀和剖檢變化。無(wú)菌采集心臟、肝臟、脾臟、腎臟和腦等器官進(jìn)行病理組織學(xué)、免疫組織化學(xué)研究，利用建立的熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)感染鴨的排毒規(guī)律和各組織中病毒含量，血清中和試驗(yàn)測(cè)定血清中特異性抗體水平，ELISA方法檢測(cè)血液中細(xì)胞因子含量。結(jié)果顯示，7周齡和21周齡鴨感染TMUV后，部分鴨出現(xiàn)明顯癥狀，而其它周齡組鴨感染TMUV后癥狀不明顯。剖檢變化顯示，7、18和21周齡組感染鴨

4、呈現(xiàn)不同程度的腦膜充血、出血，心肌水腫、松軟，肝脾腫大、出血，病理組織學(xué)結(jié)果顯示，腦小膠質(zhì)細(xì)胞增生，內(nèi)臟器官細(xì)胞腫脹、變性和壞死并伴有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，而14~16周齡感染鴨剖檢變化和組織微觀病變較輕微。免疫組化結(jié)果顯示，7周齡和21周齡組感染鴨組織中陽(yáng)性細(xì)胞著色深且分布廣，14和16周齡組感染鴨組織中陽(yáng)性細(xì)胞少。熒光定量結(jié)果顯示，7、10和21周齡組感染鴨腎臟、肝臟、腦和卵巢中檢測(cè)到的病毒拷貝數(shù)較多，而14和16周齡組感染鴨上述器官檢測(cè)到

5、的病毒拷貝數(shù)較少；7和21周齡感染組泄殖腔和咽喉拭子樣品可以檢測(cè)到較多的病毒拷貝數(shù)，而14和16周齡組感染鴨棉拭子樣品中檢測(cè)到病毒含量較少。感染后第8d所有存活鴨均可產(chǎn)生陽(yáng)性抗體，14周齡感染鴨的血清中和抗體水平要顯著高于其它周齡感染鴨。人工感染第16和18周齡育成鴨的細(xì)胞因子含量與對(duì)照組相比差異不顯著。結(jié)論：TMUV對(duì)育成鴨的致病性與感染周齡存在部分相關(guān)性，7~10周齡、18~21周齡育成鴨對(duì)TMUV較易感，而14~16周齡育成鴨對(duì)T