減蛋綜合征病毒對種鴨的致病性研究.pdf

1、減蛋綜合征病毒(Egg Drop Syndrome Virus，EDSV)屬于禽腺病毒Ⅲ型，能夠使蛋雞產(chǎn)軟殼、薄殼、無殼蛋，產(chǎn)蛋率嚴(yán)重下降，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本病可使雞產(chǎn)蛋率下降20％～30％，蛋的破損率達(dá)30％～40％，被列為世界上危害養(yǎng)雞業(yè)最嚴(yán)重的四大病毒性傳染病之一。1976年Van Eck首先報道了本病在荷蘭發(fā)生，1977年分離到EDS病毒。自1991年以來，在中國從北向南，從東到西迅速傳播，廣泛流行。在中國，1991年首次從

2、南京某雞場分離到雞源EDS病毒，命名為NE4株，1992年從一群產(chǎn)蛋減少的鴨群中分離出鴨源EDS病毒，命名為JE1株。鴨被普遍認(rèn)為是該病原的宿主之一，EDSV對鴨并不存在致病性，但是自從Bartha等1984年首次從產(chǎn)蛋下降的鴨群中分離到該病毒以來，越來越多的關(guān)于EDSV對鴨的研究在國內(nèi)外開展起來。近年來，國內(nèi)外的研究表明:在一定的條件下，鴨感染EDS-76病毒后可以使鴨發(fā)病并引起嚴(yán)重的產(chǎn)蛋下降。因此加強(qiáng)對該病的研究，有利于保護(hù)和促進(jìn)我

3、國養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。
　　本研究選用62只62周齡健康種鴨，隨機(jī)分為兩組，每組31只。其中10只用來觀察產(chǎn)蛋量變化，21只用來采集試驗(yàn)所需材料。利用分離的雞源減蛋綜合征病毒SD01株通過口腔接種途徑人工感染62周齡種鴨，每只接種1.5 mL10-3.6EID50/0.2 mL尿囊液，觀察試驗(yàn)種鴨的發(fā)病情況及臨床癥狀，在感染后不同時間剖殺，觀察各組織器官的主要剖檢變化，收集組織和棉拭子用于測定試驗(yàn)鴨的器官載毒量和排毒情況。采集血清檢測抗

4、體滴度和IL-4，IFN-γ的變化。按常規(guī)方法制備內(nèi)臟器官石蠟切片、HE染色，觀察各器官的顯微病變。結(jié)果顯示，試驗(yàn)鴨感染EDSV后出現(xiàn)輕微的呼吸道癥狀。攻毒組的IL-4、IFN-γ水平明顯高于對照組;病理組織學(xué)變化表現(xiàn)為大腦、腎臟、脾臟、肺臟、卵泡等器官內(nèi)出血以及淋巴細(xì)胞浸潤，輸卵管水腫、肝細(xì)胞腫脹。
　　選擇高度保守的六鄰體蛋白基因設(shè)計一對擴(kuò)增引物和一條MGB探針。將回收PCR產(chǎn)物克隆到pMD18-T載體上、轉(zhuǎn)化，重組質(zhì)粒，將篩

5、選的陽性質(zhì)粒10倍梯度倍比稀釋，作為構(gòu)建Taqman-MGB熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的模板。結(jié)果表明，建立的Taqman-MGB熒光定量PCR檢測方法敏感度高，最少能檢測到10 Copies/μL的模板，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)較高，R2值均在0.99以上;特異性檢測結(jié)果表明，除EDSV有擴(kuò)增曲線外，其它病毒無擴(kuò)增曲線產(chǎn)生，說明該方法能特異性的檢測EDSV;重復(fù)性檢測結(jié)果表明，批內(nèi)、批間的變異系數(shù)均不大于1.5％。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，建立的Taq