microRNA在離焦性近視小鼠視網(wǎng)膜中表達差異的研究.pdf

1、目的:
　　本課題擬通過遠視性離焦方法誘導(dǎo)小鼠近視，對誘導(dǎo)裝置、方法和誘導(dǎo)效果進行相應(yīng)評估;采用芯片檢測方法分析離焦性近視眼視網(wǎng)膜miRNA的表達變化，篩選出部分miRNA位點進行實時定量PCR驗證;利用生物信息學(xué)方法分析小鼠視網(wǎng)膜高表達miRNA的功能，預(yù)測差異性表達的miRNA潛在的生物學(xué)功能。
　　方法:
　　1.采用自行設(shè)計的非接觸式誘導(dǎo)工具-頭部固定鏡架裝置對4周齡C57BL6J小鼠進行近視誘導(dǎo)，佩戴4周后評

2、估該誘導(dǎo)轉(zhuǎn)置的穩(wěn)定性和安全性，以及近視模型的有效性。屈光度評估采用視網(wǎng)膜檢影驗光法，眼球軸向參數(shù)測量采用自行搭建的光學(xué)相干斷層掃描系統(tǒng)（系統(tǒng)測量前進行重復(fù)性、再現(xiàn)性和準確性的評估）。設(shè)立實驗組和對照組，實驗組小鼠行右眼-15.0D誘導(dǎo)，左眼為自身對照，對照組小鼠雙眼不作處理。
　　2.采用miRCURY芯片(miRNA位點信息來源于miRBase18.0)檢測分析miRNA在小鼠離焦性近視眼視網(wǎng)膜中的表達變化，篩選部分差異性表達位

3、點進行樣本內(nèi)和樣本間的實時定量PCR驗證。
　　3.篩選小鼠視網(wǎng)膜表達濃度高的miRNA以及實驗性近視眼視網(wǎng)膜中差異性表達的miRNA進行生物信息學(xué)分析，包括實驗驗證的靶基因功能，靶基因預(yù)測和通路分析等。
　　結(jié)果:
　　1.成功設(shè)計了一款應(yīng)用于小鼠近視模型制作的頭部固定鏡架裝置，該誘導(dǎo)裝置的手術(shù)安裝過程簡單，具有較高的穩(wěn)定性、安全性和有效性。OCT測量系統(tǒng)具有較高的重復(fù)性、再現(xiàn)性和準確性。C57BL6J小鼠行-15.

4、0D的單眼遠視性離焦誘導(dǎo)，自4周齡到8周齡共誘導(dǎo)4周，誘導(dǎo)眼與自身對照眼相比呈現(xiàn)-4.90±2.17 D(p＜0.05)的近視漂移，伴隨眼軸顯著性增長(以玻璃體腔深度變大為主，0.023±0.033mm;p＜0.05)。對照組小鼠未發(fā)現(xiàn)屈光度和眼軸的顯著性眼別差異(p＞0.05);
　　2.小鼠視網(wǎng)膜miRNA的表達具有組織特異性。實驗性近視眼視網(wǎng)膜的miRNA表達與自身對照眼存在顯著差異，但表達變化的幅度不大。共有71個miRN

5、A表達上調(diào)1.2倍以上，包括miR-183/96/182-5p，29b-3p，9-5p和181a-5等;共有65個miRNA表達下調(diào)的1.2倍以上，包括let-7家族，miR-103-3p等。采用實時定量PCR方法對7個位點進行樣本內(nèi)驗證，其中表達濃度高的miR-183/96/182-5p，181a-5p和9-5p的驗證結(jié)果與芯片一致。樣本間驗證證實miR-183/96/182-5p，181a-5p和9-5p在近視眼視網(wǎng)膜中表達升高。<

6、br>　　3.生物信息學(xué)分析提示小鼠視網(wǎng)膜的miRNA在正常生理功能調(diào)節(jié)和疾病模型中都發(fā)揮重要作用。視網(wǎng)膜表達濃度高的miRNA主要參與調(diào)節(jié)神經(jīng)突觸功能，如Dopaminergic synapse和Cholinergic synapse，也與一些已被驗證的與實驗性近視相關(guān)的信號通路有關(guān)，如Insulin signaling pathway、Wnt signaling pathway。近視眼視網(wǎng)膜中表達升高的miRNA中的miR-29家族

7、和表達降低的let-7家族，功能分析均顯示與ECM-receptor interaction和PI3K-Akt signaling pathway相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.采用頭部固定鏡架裝置對小鼠進行近視誘導(dǎo)具有良好的穩(wěn)定性、安全性和有效性，適合進一步推廣。搭建的光學(xué)相干斷層掃描系統(tǒng)具備良好的重復(fù)性、再現(xiàn)性和準確性，可應(yīng)用于小鼠眼球的參數(shù)測量。小鼠遠視性離焦誘導(dǎo)近視模型主要表現(xiàn)為誘導(dǎo)眼近視化發(fā)展和眼軸增長。
　　2

8、.近視眼視網(wǎng)膜中miRNA表達存在變化，但幅度不大。其中近視眼視網(wǎng)膜中有71個miRNA表達升高1.2倍以上，包括183/96/182-5p，29b-3p，9-5p和181a-5p等;65個miRNA表達降低1.2倍以上，包括miR-98-5p，miR-103-3p和let-7家族等。實時定量RCR驗證了miR-183/96/182-5p，9-5p和181a-5p在離焦性近視眼視網(wǎng)膜中表達顯著高于自身對照眼。
　　3.生物信息學(xué)分