宮內(nèi)亞臨床感染對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的增敏作用及其相關機制.pdf

1、背景與目的：
　　隨著醫(yī)療技術水平的不斷提高，早產(chǎn)兒的存活率明顯提高，與此同時早產(chǎn)兒腦損傷的發(fā)病率亦呈逐年增高趨勢。早產(chǎn)兒腦損傷主要包括腦室或腦室周圍出血(PIVH)及腦室周圍白質(zhì)軟化(PVL)，其中PVL是早產(chǎn)兒腦損傷中最常見的病理類型。流行病學調(diào)查資料顯示，缺氧缺血(HI)和感染是導致PVL或腦癱的兩個重要因素。雖然單一HI或感染不足以導致腦損傷，但在圍生期兩者聯(lián)合作用可能會對未成熟腦造成嚴重損傷。孕母絨毛膜炎、胎膜早破及早產(chǎn)

2、兒窒息缺氧等情況在臨床工作中均較常見，且常常同時存在。生后感染對HI的協(xié)同作用國外已有較多研究，而關于宮內(nèi)亞臨床感染對新生鼠HI是否具有增敏作用，目前國內(nèi)外尚無明確報道，且其相關的動物模型也不完全成熟。因此，本實驗首先建立宮內(nèi)亞臨床感染聯(lián)合新生鼠HI動物模型，從MBP、MAP-2及TNF-a等方面證明腦損傷的存在，并在此基礎上，驗證EPO對腦白質(zhì)損傷的保護作用，通過檢測未成熟腦損傷后組蛋白去乙?；?HDACs)及組蛋白去乙酰化酶1mR

3、NA(HDAC1 mRNA)表達水平變化，從表觀遺傳學方面探討未成熟腦損傷可能的相關機制。
　　材料與方法：
　　孕鼠分為LPS組和生理鹽水(N.S)組，于孕15天分別腹腔注射LPS0.3mg/kg或等劑量N.S，繼續(xù)飼養(yǎng)至分娩，稱取新生鼠出生體重。5日齡新生大鼠隨機分為對照組、LPS組、HI組、LPS+HI組。根據(jù)是否采用EPO干預，將LPS+HI組分為LPS+HI+N.S組、LPS+HI+EPO組。
　　缺氧缺血性

4、腦損傷模型參照Rice等的方法并略加改進。采用乙醚吸入麻醉，分離并雙結(jié)扎左頸總動脈，中間剪斷左頸總動脈，縫合皮膚傷口后放回鼠籠恢復1h，而后將其放入濕化、含氧氣濃度為8％的36℃恒溫箱內(nèi)40min即制成腦缺氧缺血模型，即HI組、LPS+HI組。對照組及LPS組動物只分離左頸總動脈，不進行動脈結(jié)扎和缺氧處理。干預組在HI前4h和HI后立即腹腔內(nèi)注射EPO(5000U/kg)或等劑量N.S，每天用藥1次，持續(xù)應用至HI后第4天（共5次）。<

5、br>　　HI后6h、24h、7d處死新生鼠，留取腦組織。ELISA方法檢測腦組織中TNF-a及HDACs含量，免疫組化法檢測MAP-2的表達及HI后7d（即12日齡）腦組織MBP蛋白含量，MAP-2mRNA及HDAC1 mRNA含量采用Real Time PCR方法檢測。
　　結(jié)果：
　　1.不同處理組孕鼠及新生大鼠一般情況比較
　　N.S組與LPS組孕鼠活動量、飲食、仔鼠死產(chǎn)率等無差異，兩組均未出現(xiàn)早產(chǎn)、死胎等。N

6、.S組孕鼠分娩的新生大鼠出生體重(6.56±0.33g)與LPS組孕鼠分娩的新生大鼠出生體重(6.35±0.37g)相比，差異無統(tǒng)計學意義(t=1.598，P=0.123)。
　　2.HI后TNF-a、MBP表達情況
　　HI后6h及24h，LPS+HI組新生大鼠腦組織TNF-a含量高于另外三組，差異有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05），而其余三組之間相比，差異無統(tǒng)計學意義。HI后7d，LPS+HI組的MBP表達水平最低，與其他組

7、相比差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05)，另三組之間差異無統(tǒng)計學差異。
　　3.HI后MAP-2、MAP-2mRNA表達的變化
　　LPS+HI組MAP-2免疫組化染色在HI后24h出現(xiàn)散在壞死灶，其余3組均未出現(xiàn)壞死灶。LPS+HI組MAP-2mRNA在損傷后6h檢測到表達降低，后逐漸升高，與另外三組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　4.EPO對未成熟腦損傷后的保護作用
　　HI后7d，LPS+HI

8、+EPO組MBP的IOD值(131.59±2.24)明顯高于LPS+HI+N.S組(103.36±3.62)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　5.未成熟腦損傷后表觀遺傳學變化
　　HI后6h、24及7d，LPS+HI組HDACs及HDAC1 mRNA的表達水平均最高，與其他組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05），另三組之間差異無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論：
　　1.宮內(nèi)亞臨床感染對新生大鼠缺氧缺血后腦損