守宮硫酸糖肽通過bFGF抑制腫瘤淋巴管生成的體外研究.pdf

1、目的:
　　腫瘤淋巴管生成是腫瘤局部淋巴結(jié)浸潤和遠處轉(zhuǎn)移的必要條件，抑制腫瘤淋巴管生成從而抑制腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移已成為惡性腫瘤治療的新靶點。堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是一種肝素依賴性的生長因子，它是重要的促淋巴管生成因子。守宮硫酸糖肽是傳統(tǒng)中藥守宮抗腫瘤的主要成份，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與肝素相類似，我們之前的研究表明守宮硫酸糖肽是bFGF的靶向抑制劑。本課題通過守宮硫酸糖肽對

2、腫瘤淋巴管內(nèi)皮細胞的體外研究，探究守宮硫酸糖肽對腫瘤淋巴管生成的影響及其作用機制。
　　方法:
　　1.取人腫瘤淋巴管內(nèi)皮細胞(hLECs)，設(shè)守宮硫酸糖肽高劑量組、守宮硫酸糖肽低劑量組、守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組、bFGF組、陰性對照組。通過MTS法檢測守宮硫酸糖肽對人淋巴管內(nèi)皮細胞增殖的影響，并繪制生長曲線。
　　2.分組同前。通過Wound healing和Transw

3、ell實驗檢測守宮硫酸糖肽對人淋巴管內(nèi)皮細胞遷移的影響。
　　3.分組同前。倒置顯微鏡下觀察守宮硫酸糖肽對人淋巴管內(nèi)皮細胞形成淋巴管樣結(jié)構(gòu)的影響。
　　4.分組同前。通過Western-blot實驗檢測藥物作用后hLECs內(nèi)Erk、p-Erk表達的情況。
　　結(jié)果:
　　1.MTS法計數(shù)細胞探究hLECs增殖情況:守宮硫酸糖肽高劑量組及守宮硫酸糖肽低劑量組增殖的細胞數(shù)較空白對照組未見明顯差異(P＞0.05)，bF

4、GF組增殖的細胞數(shù)較空白對照組明顯增多（P＜0.05）。而守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組增殖的細胞數(shù)較bFGF單用組明顯減少(P＜0.05)，其中以守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組增殖的細胞數(shù)較bFGF單用組減少的更加明顯。
　　2.(1) Wound healing實驗:從圖片細胞遷移的距離來看，守宮硫酸糖肽高劑量組及守宮硫酸糖肽低劑量組細胞遷移的距離較空白對照組未見明顯差異(P＞0.0

5、5)，bFGF組較空白對照組有促進細胞遷移的作用(P＜0.05）。而守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組細胞遷移的距離較bFGF單用組明顯減?。≒＜0.05），其中以守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組細胞遷移的距離較bFGF單用組減小的更加明顯。
　　(2) Transwell實驗:從穿過Transwell小室膜的細胞數(shù)來看，守宮硫酸糖肽高劑量組及守宮硫酸糖肽低劑量組較空白對照組未見明顯差異(P＞

6、0.05)，bFGF組較空白對照組明顯增多(P＜0.05）。而守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組較bFGF單用組明顯減少(P＜0.05），其中以守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組較bFGF單用組細胞數(shù)減少的更加明顯。
　　3.倒置顯微鏡下觀察hLECs形成淋巴管樣結(jié)構(gòu)的情況:從hLECs在基質(zhì)膠上形成的封閉的不規(guī)則多邊形的數(shù)目來看，守宮硫酸糖肽高劑量組及守宮硫酸糖肽低劑量組較空白對照組未見明顯差

7、異(P＞0.05），bFGF組較空白對照組明顯增多(P＜0.05）。而守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組較bFGF單用組明顯減少(P＜0.05），其中以守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組較bFGF單用組封閉的不規(guī)則多邊形數(shù)目減少的更加明顯。
　　4.Western-blot實驗檢測hLECs內(nèi)Erk、p-Erk表達:守宮硫酸糖肽高劑量組、守宮硫酸糖肽低劑量組、守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、

8、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組、bFGF組hLECs內(nèi)Erk的表達較空白對照組均未見明顯差異。守宮硫酸糖肽高劑量組及守宮硫酸糖肽低劑量組hLECs內(nèi)p-Erk的表達較空白對照組未見明顯差異，bFGF組hLECs內(nèi)p-Erk的表達較空白對照組明顯增多。而守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組hLECs內(nèi)p-Erk的表達較bFGF單用組明顯減少。
　　結(jié)論:
　　1.守宮硫酸糖肽本身對hLEC

9、s的增殖沒有影響，但是守宮硫酸糖肽能抑制bFGF誘導(dǎo)的hLECs的增殖。
　　2.守宮硫酸糖肽本身對hLECs的遷移沒有影響，但是守宮硫酸糖肽能抑制bFGF誘導(dǎo)的hLECs的遷移。
　　3.守宮硫酸糖肽本身對hLECs淋巴管樣結(jié)構(gòu)的形成沒有影響，但是守宮硫酸糖肽能減弱bFGF誘導(dǎo)的hLECs淋巴管樣結(jié)構(gòu)的形成。
　　4.守宮硫酸糖肽對bFGF誘導(dǎo)的hLECs增殖、遷移、淋巴管樣結(jié)構(gòu)形成的抑制作用部分是通過下調(diào)hLECs