促血管生成素2調(diào)節(jié)淋巴管新生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：基因敲除研究表明，促血管生成素2(Angiopoietin2，Ang2)與淋巴管的發(fā)育有關(guān)，但是淋巴管發(fā)育和新生及其調(diào)節(jié)十分復(fù)雜，Ang2在其中的作用機(jī)理并不清楚。本課題通過了解人真皮來源微淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的特性以及Ang2在體內(nèi)外的作用來研究Ang2與皮膚淋巴管新生的相互關(guān)系。 方法：人真皮來源微淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(HDLECs)通過酶消化結(jié)合CD34免疫磁珠陰性分選和CD31免疫磁珠陽性分選獲得并進(jìn)行鑒定，檢測HDLECs和

2、人皮膚組織表達(dá)Ang2的特點(diǎn)。HDLECs在體外進(jìn)行單獨(dú)培養(yǎng)以及與人皮膚成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，研究這兩種培養(yǎng)條件下Ang2，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C(VEGF-C)和其他細(xì)胞因子對(duì)HDLECs增殖和遷移的影響。將人Ang2和VEGF-C基因克隆入pCDNA3.1真核表達(dá)質(zhì)粒載體并進(jìn)行體外表達(dá)鑒定，制作小鼠尾部慢性阻塞性淋巴水腫模型。通過質(zhì)粒注射的方法使Ang2和VEGF-C基因在淋巴水腫的鼠尾皮膚組織中過表達(dá)，觀察兩者對(duì)淋巴管再生的影響以及對(duì)

3、淋巴水腫的治療作用。 結(jié)果：膠原酶消化法結(jié)合免疫磁珠分選可以分離純化人真皮來＼源微淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞并進(jìn)行體外培養(yǎng)。HDLECs表達(dá)Ang2但不表達(dá)VEGF-C，而人皮膚成纖維細(xì)胞表達(dá)VEGF-C但不表達(dá)Ang2，這種特點(diǎn)可能與淋巴管新生的調(diào)節(jié)有關(guān)。Ang2在體外對(duì)HDLECs沒有直接的促增殖和遷移作用。但是，當(dāng)與人皮膚成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，Ang2能夠促進(jìn)HDLECs的增殖和遷移，提示Ang2間接調(diào)節(jié)淋巴管的新生。轉(zhuǎn)VEGF-C基因