辣椒溶桿菌X2-3抗菌物質(zhì)的初步分離及其特性分析.pdf_第1頁(yè)
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1、辣椒溶桿菌(Lysobacter capsici)X2-3是本實(shí)驗(yàn)室從小麥根際土壤中分離到的一株對(duì)小麥紋枯病菌(R. cerealis)具有較好拮抗作用的菌株,該菌株對(duì)立枯絲核菌(R. solani)、小麥根腐病菌(B. sorokiniana)等多種植物病原真菌和群結(jié)腐霉(P. myriotylum)等卵菌有明顯的抑菌活性。為了解該菌株產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)及其作用特點(diǎn),本研究首先對(duì)該菌株的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,初步分離了該菌株產(chǎn)生的抗菌物質(zhì);

2、在此基礎(chǔ)上,分析了抗菌物質(zhì)的理化性質(zhì),并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了初步研究。取得的主要研究結(jié)果如下:
  1、菌株X2-3培養(yǎng)條件的優(yōu)化
  以R. solani為指示菌,用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了不同培養(yǎng)基條件下,L.capsici X2-3產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)的抑菌能力。結(jié)果表明,X2-3經(jīng)PDB培養(yǎng)液培養(yǎng)3天,其無(wú)孢子濾液對(duì)R. solani抑菌活性最強(qiáng),菌落直徑明顯小于對(duì)照。
  以PDB為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,從接菌量、pH、裝液量、培

3、養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度及轉(zhuǎn)速等幾個(gè)方面,對(duì)菌株X2-3的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,結(jié)果表明,在pH5.0、接種量2%、裝液量100ml/250ml、轉(zhuǎn)速為180r/min時(shí),28℃培養(yǎng)120h,X2-3無(wú)孢子濾液對(duì) R. cerealis抑菌活性最強(qiáng),確定該條件為最優(yōu)培養(yǎng)條件。
  2、菌株X2-3抗菌物質(zhì)的分離純化
  為分離純化抗菌物質(zhì),首先,對(duì)L. capsici X2-3無(wú)菌濾液用硫酸銨沉淀,抑菌活性測(cè)定發(fā)現(xiàn),沉淀物對(duì)指示菌R.

4、 solani有明顯的抑菌活性,上清液中未發(fā)現(xiàn)有活性物質(zhì)。
  以三氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇3種溶劑為萃取劑分析了不同萃取劑對(duì)抗菌物質(zhì)的萃取效果,發(fā)現(xiàn)硫酸銨沉淀物經(jīng)甲醇萃取后,萃取物對(duì)指示菌R. solani的抑菌活性最強(qiáng),抑菌半徑約5mm,乙酸乙酯和三氯甲烷萃取液抑菌半徑分別為2mm和1mm;對(duì)甲醇萃取物用紫外分光光度計(jì)在200-800nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行光譜掃描,發(fā)現(xiàn)粗提物在244nm處有最大吸收峰。
  采用硅膠柱層析方法分

5、析了石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇等5種洗脫劑對(duì)粗提物的洗脫效果,發(fā)現(xiàn),以甲醇為洗脫劑時(shí),洗脫液紫外吸光度最高,為2.5AU,洗脫效果最好,其它洗脫液效果較差。確定甲醇為柱層析的最佳洗脫液。
  3、菌株X2-3抗菌粗提物的理化性質(zhì)分析
  從溫度、紫外線和蛋白酶K處理等三個(gè)方面分析了抗菌粗提物的穩(wěn)定性,結(jié)果發(fā)現(xiàn),X2-3產(chǎn)生的抗真菌物質(zhì)在40℃-80℃水浴處理30min后,其抗菌活性與對(duì)照幾乎沒(méi)有差異;90-1

6、00℃水浴處理后,抗菌活性雖顯著降低,但仍有抑菌活性,表明該物質(zhì)對(duì)溫度有一定忍耐力。
  粗提物經(jīng)蛋白酶K處理2h后,該物質(zhì)的抗菌活性與對(duì)照幾乎沒(méi)有差異,說(shuō)明該物質(zhì)對(duì)蛋白酶K不敏感。
  粗提物經(jīng)紫外照射1h、2h、4h后,抗菌物質(zhì)的抑菌活性與對(duì)照無(wú)明顯差異,說(shuō)明該抗菌物質(zhì)具有較好的紫外穩(wěn)定性。
  4、抗菌粗提物的抗菌特性分析
  生物測(cè)定發(fā)現(xiàn),經(jīng)甲醇萃取的粗提物對(duì)B. sorokiniana、Colletot

7、richum truncatum、F. graminearum和P. myriotylum等真菌和卵菌都有明顯的抑菌活性;以玉蘭葉斑病菌和煙草青枯病菌為指示菌,分析了粗提物的抗細(xì)菌活性,發(fā)現(xiàn),該物質(zhì)對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌玉蘭葉斑病菌有明顯的抑菌活性,其最小抑菌濃度為1.72μg/ml,但該物質(zhì)對(duì)煙草青枯病菌沒(méi)有作用。
  5、粗提物對(duì)病原真菌的作用機(jī)制初步分析
  以R. solani和B. sorokiniana為指示菌,初步分

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