養(yǎng)殖大菱鲆病原菌的分離鑒定、組織病理學(xué)及免疫組織化學(xué).pdf

1、大菱鲆是近年來(lái)我國(guó)引進(jìn)國(guó)外優(yōu)質(zhì)水產(chǎn)養(yǎng)殖品種中最成功的一種，它抗病力較強(qiáng)，性少動(dòng)，容易接受配合飼料，飼料系數(shù)低，生長(zhǎng)迅速，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，深受養(yǎng)殖戶的喜愛(ài)。但是，隨著魚(yú)的本土化以及養(yǎng)殖方式的缺陷，逐漸出現(xiàn)了各種疾病，其中細(xì)菌性傳染病最為常見(jiàn)。 我們?cè)?007年1月份和4月份的幾批病魚(yú)中分離得到的三株致病菌進(jìn)行了鑒定。這三株致病菌分別為殺鮭氣單胞菌無(wú)色亞種(Aeromonas salmonicida subsp.achromogenes

2、)(編號(hào)db14)、牙鲆腸弧菌(Vibrio ichthyoenteri)(編號(hào)da3)和腐敗希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)(編號(hào)db6)。 菌株db14從患病大菱鲆肝臟中分離出，人工感染試驗(yàn)證實(shí)db14對(duì)大菱鲆及模式動(dòng)物斑馬魚(yú)都具有很強(qiáng)的致病性，其半數(shù)致死量分別為1×105cfu/尾(25g)和1.3×102cfu/尾。該病原菌革蘭氏染色陰性，菌體呈桿狀。綜合該菌在形態(tài)、生理生化特征及16S rDN

3、A同源性等方面的結(jié)果，確認(rèn)db14為殺鮭氣單胞菌無(wú)色亞種。該菌株對(duì)復(fù)達(dá)欣，菌必治、丁胺卡那霉素和氯霉素等抗生素敏感，對(duì)多種抗生素有完全的抗性。受db14感染發(fā)病的大菱鲆肝臟中細(xì)胞組織水腫，細(xì)胞內(nèi)沉積大量蛋白類(lèi)物質(zhì)。腎臟中組織細(xì)胞壞死，腎小管發(fā)生水腫。小腸絨毛中的固有層萎縮。 菌株da3從患病大菱鲆膽囊中分離出，人工感染試驗(yàn)證實(shí)da3對(duì)大菱鲆有較強(qiáng)的致病性，其對(duì)25g重大菱鲆的半數(shù)致死量為2×106cfu/尾。該病原菌革蘭氏染色陰

4、性，菌體呈桿狀。綜合該菌在形態(tài)、生理生化特征及16S rDNA同源性等方面的結(jié)果，確認(rèn)da3為牙鲆腸弧菌(Vibrio ichthyoenteri)。受da3感染發(fā)病的大菱鲆病魚(yú)肝臟中可見(jiàn)肝細(xì)胞萎縮變形，染色變深，嗜堿性。病魚(yú)腎臟中可見(jiàn)腎組織細(xì)胞受損，嗜堿性，細(xì)胞核膨脹，腎小球和腎小管萎縮。小腸杯形細(xì)胞腫脹，固有層萎縮。腦組織中出現(xiàn)大型病理性空泡。肝、腎和脾的組織中紅細(xì)胞減少。 菌株db6從患病大菱鲆腎臟中分離出，人工感染試驗(yàn)證

5、實(shí)db6有較強(qiáng)的致病性。該病原菌革蘭氏染色陰性，菌體呈桿狀。綜合該菌在形態(tài)、生理生化特征及16S rDNA同源性等方面的結(jié)果，確認(rèn)為腐敗希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)。該菌是一種水生菌，但作為病原體多見(jiàn)報(bào)道在人體中發(fā)現(xiàn)，而作為魚(yú)類(lèi)病原菌不常見(jiàn)。該菌株對(duì)氟哌酸敏感。受感染發(fā)病的大菱鲆肝細(xì)胞和腎間質(zhì)細(xì)胞破碎，腸上皮潰瘍。 以上三株菌都是首次作為大菱鲆的病原菌出現(xiàn)，反映了當(dāng)前大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)正在面臨日益增多的病

6、原菌的威脅。 對(duì)于病原菌在魚(yú)體中的定位，國(guó)內(nèi)相關(guān)的研究并不多。我們運(yùn)用間接免疫抗體技術(shù)和組織革蘭氏染色法來(lái)確定遲緩愛(ài)德華氏菌在其感染致病的大菱鲆體內(nèi)的分布，發(fā)現(xiàn)肝、腎和脾等器官的組織結(jié)構(gòu)發(fā)生了顯著的變化，在這幾種器官中也發(fā)現(xiàn)了少量菌體，在這些器官外面的結(jié)締組織中發(fā)現(xiàn)了大量菌體。我們發(fā)現(xiàn)它在不同的組織中有不同的分布特點(diǎn)：在器官內(nèi)部，菌體呈菌落狀態(tài)存在于巨噬細(xì)胞中，在腸腔粘膜和內(nèi)臟器官表面的結(jié)締組織的細(xì)胞間質(zhì)中，菌體可單個(gè)，兩三個(gè)存