養(yǎng)殖大菱鲆病原菌的分離鑒定、組織病理學(xué)及免疫組織化學(xué).pdf

1、大菱鲆是近年來我國引進(jìn)國外優(yōu)質(zhì)水產(chǎn)養(yǎng)殖品種中最成功的一種，它抗病力較強(qiáng)，性少動，容易接受配合飼料，飼料系數(shù)低，生長迅速，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，深受養(yǎng)殖戶的喜愛。但是，隨著魚的本土化以及養(yǎng)殖方式的缺陷，逐漸出現(xiàn)了各種疾病，其中細(xì)菌性傳染病最為常見。 我們在2007年1月份和4月份的幾批病魚中分離得到的三株致病菌進(jìn)行了鑒定。這三株致病菌分別為殺鮭氣單胞菌無色亞種(Aeromonas salmonicida subsp.achromogenes

2、)(編號db14)、牙鲆腸弧菌(Vibrio ichthyoenteri)(編號da3)和腐敗希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)(編號db6)。 菌株db14從患病大菱鲆肝臟中分離出，人工感染試驗(yàn)證實(shí)db14對大菱鲆及模式動物斑馬魚都具有很強(qiáng)的致病性，其半數(shù)致死量分別為1×105cfu/尾(25g)和1.3×102cfu/尾。該病原菌革蘭氏染色陰性，菌體呈桿狀。綜合該菌在形態(tài)、生理生化特征及16S rDN

3、A同源性等方面的結(jié)果，確認(rèn)db14為殺鮭氣單胞菌無色亞種。該菌株對復(fù)達(dá)欣，菌必治、丁胺卡那霉素和氯霉素等抗生素敏感，對多種抗生素有完全的抗性。受db14感染發(fā)病的大菱鲆肝臟中細(xì)胞組織水腫，細(xì)胞內(nèi)沉積大量蛋白類物質(zhì)。腎臟中組織細(xì)胞壞死，腎小管發(fā)生水腫。小腸絨毛中的固有層萎縮。 菌株da3從患病大菱鲆膽囊中分離出，人工感染試驗(yàn)證實(shí)da3對大菱鲆有較強(qiáng)的致病性，其對25g重大菱鲆的半數(shù)致死量為2×106cfu/尾。該病原菌革蘭氏染色陰

4、性，菌體呈桿狀。綜合該菌在形態(tài)、生理生化特征及16S rDNA同源性等方面的結(jié)果，確認(rèn)da3為牙鲆腸弧菌(Vibrio ichthyoenteri)。受da3感染發(fā)病的大菱鲆病魚肝臟中可見肝細(xì)胞萎縮變形，染色變深，嗜堿性。病魚腎臟中可見腎組織細(xì)胞受損，嗜堿性，細(xì)胞核膨脹，腎小球和腎小管萎縮。小腸杯形細(xì)胞腫脹，固有層萎縮。腦組織中出現(xiàn)大型病理性空泡。肝、腎和脾的組織中紅細(xì)胞減少。 菌株db6從患病大菱鲆腎臟中分離出，人工感染試驗(yàn)證

5、實(shí)db6有較強(qiáng)的致病性。該病原菌革蘭氏染色陰性，菌體呈桿狀。綜合該菌在形態(tài)、生理生化特征及16S rDNA同源性等方面的結(jié)果，確認(rèn)為腐敗希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)。該菌是一種水生菌，但作為病原體多見報(bào)道在人體中發(fā)現(xiàn)，而作為魚類病原菌不常見。該菌株對氟哌酸敏感。受感染發(fā)病的大菱鲆肝細(xì)胞和腎間質(zhì)細(xì)胞破碎，腸上皮潰瘍。 以上三株菌都是首次作為大菱鲆的病原菌出現(xiàn)，反映了當(dāng)前大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)正在面臨日益增多的病

6、原菌的威脅。 對于病原菌在魚體中的定位，國內(nèi)相關(guān)的研究并不多。我們運(yùn)用間接免疫抗體技術(shù)和組織革蘭氏染色法來確定遲緩愛德華氏菌在其感染致病的大菱鲆體內(nèi)的分布，發(fā)現(xiàn)肝、腎和脾等器官的組織結(jié)構(gòu)發(fā)生了顯著的變化，在這幾種器官中也發(fā)現(xiàn)了少量菌體，在這些器官外面的結(jié)締組織中發(fā)現(xiàn)了大量菌體。我們發(fā)現(xiàn)它在不同的組織中有不同的分布特點(diǎn)：在器官內(nèi)部，菌體呈菌落狀態(tài)存在于巨噬細(xì)胞中，在腸腔粘膜和內(nèi)臟器官表面的結(jié)締組織的細(xì)胞間質(zhì)中，菌體可單個(gè)，兩三個(gè)存