三七總皂甙對大鼠肝移植缺血-再灌注損傷細胞凋亡及中性粒細胞浸潤的影響.pdf

1、第一部分:大鼠原位肝移植(OLT)模型的建立 目的：探討大鼠原位肝移植(OLT)模型的建立方法，為肝移植的相關(guān)研究提供穩(wěn)定的模型基礎。 方法：采用Kamada二袖套法，并在此基礎上加以改良，共施行了78例次大鼠原位肝移植(OLT)手術(shù)。 結(jié)果：在48例定型手術(shù)中，供肝的熱缺血時間為0～1min，冷缺血時間為2h，無肝期平均為(19.25±2.27)min(16～23min)，手術(shù)成功率為91.7％(44/48)。

2、 結(jié)論：該模型穩(wěn)定可靠，可為肝移植的基礎及臨床相關(guān)研究提供較為理想的研究手段。 第二部分:三七總皂甙對大鼠肝移植缺血/再灌注損傷細胞凋亡及其信號傳導的影響 目的：探討三七總皂甙(PNS)預處理對大鼠供肝的保護作用及其對供肝細胞凋亡及TNF-a、Bcl-2和Caspase-3表達的影響。 方法：雄性SD大鼠分別用作供、受體，采用Kamada's袖套改良法建立原位肝移植模型，根據(jù)供肝切取前1h是否靜脈注射PN

3、S(50mg/kg)將大鼠隨機分為PNS預處理組(PNS組)和NS對照組(NS組)；另設假手術(shù)作對照組(SO組)。分別于供肝再灌注后2h、6h及24h處死各組動物，檢測血清ALT及AST，HE切片作病理組織學檢查，TUNEL法檢測肝細胞凋亡，RT-PCR法檢測TNF-a、Bcl-2和Caspase-3mRNA的表達，免疫組織化學法檢測TNF-a、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表達。 結(jié)果：供肝再灌注后2h、6h及24h各時

4、點，PNS組大鼠血清ALT、AST水平及肝細胞凋亡指數(shù)(AI)均明顯低于NS組(P＜0.05)；供肝再灌注后6h及24h，PNS組大鼠肝組織Bcl-2mRNA的表達水平明顯高于NS組(P＜0.05)，再灌注后24h，PNS組大鼠肝組織Bcl-2蛋白的表達水平明顯高于NS組(P＜0.05)；供肝再灌注后2h、6h，PNS組大鼠肝組織TNF-a和Caspase-3mRNA的相對表達水平明顯低于NS組(P＜0.05)，而再灌后6h，PNS組大

5、鼠肝組織TNF-a和Caspase-3蛋白的表達水平明顯低于NS組(P＜0.05)。 結(jié)論：PNS預處理大鼠供肝，可以有效地減輕移植肝的缺血/再灌注損傷和細胞凋亡；抗細胞凋亡可能為PNS減輕肝移植缺血/再灌注損傷的機制之一；PNS抗細胞凋亡的機制與影響細胞凋亡信號的傳導，即抑制促凋亡基因TNF-a、Caspase-3的表達和促進抗凋亡基因Bcl-2的表達有關(guān)。 第三部分三七總皂甙對大鼠肝移植缺血/再灌注損傷中性粒細胞浸

6、潤的影響 目的：探討三七總皂甙(PNS)預處理對大鼠供肝的保護作用及其對供肝組織中性粒細胞(PMN)浸潤及TNF-a和ICAM-1表達的影響。 方法：雄性SD大鼠分別用作供、受體，采用Kamadas袖套改良法建立原位肝移植模型，根據(jù)供肝切取前1h是否靜脈注射PNS(50mg/kg)將大鼠隨機分為PNS預處理組(PNS組)和NS對照組(NS組)；另設假手術(shù)作對照組(SO組)。分別于供肝再灌注后2h、6h及24h處死各組動

7、物，檢測血清ALT及AST，HE切片作病理組織學檢查，比色法測定髓過氧化物酶(MPO)的含量，RT-PCR法檢測TNF-a和ICAM-1mRNA的表達，免疫組織化學法檢測TNF-a和ICAM-1蛋白的表達。 結(jié)果：供肝再灌注后2h、6h及24h各時點，PNS組大鼠血清ALT及AST水平均明顯低于NS組(P＜0.05)；再灌注后6h，NS組大鼠肝組織的MPO含量明顯高于PNS組(P＜0.05)；供肝再灌注后2h、6h，PNS組大鼠