大鼠脂肪干細(xì)胞對(duì)自體肝移植缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：
　　肝臟缺血再灌注損傷指肝臟經(jīng)過(guò)一段時(shí)間供血供氧不足，恢復(fù)血供后出現(xiàn)再灌注損傷。這種損傷常見(jiàn)于肝切除，肝移植，創(chuàng)傷等。缺血再灌注損傷在肝移植的過(guò)程中無(wú)法避免。減少肝臟缺血再灌注損傷，改善供肝的肝功能，需要尋找更多解決途徑。有研究表明，間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于腦和腎缺血再灌注有一定保護(hù)作用。但對(duì)于肝臟缺血再灌注的研究較少，機(jī)制不明。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞是一種來(lái)源于脂肪組織的間充質(zhì)干細(xì)胞。脂肪干細(xì)胞有特定的干細(xì)胞功能，可以從脂肪組織中提取

2、，提取方法簡(jiǎn)單，損傷小，并且具有較高的干細(xì)胞增殖率，國(guó)內(nèi)外研究較少。因此本實(shí)驗(yàn)旨在研究脂肪干細(xì)胞對(duì)大鼠自體肝移植缺血再灌注損傷模型的保護(hù)作用機(jī)制。
　　目的：
　　1.建立SD大鼠自體肝移植模型并分組。SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、自體肝移植缺血再灌注組（ischemia-reperfusion group，IR組）、自體肝移植缺血再灌注+脂肪干細(xì)胞回填組（adipose-derived stem cells group，ADS

3、Cs組）。假手術(shù)組上腹正中切口，暴露并離斷肝臟韌帶，不做其他處理。IR組用動(dòng)脈夾夾閉肝門阻斷血流，肝素注射液灌注15min，不做給藥。ADSCs組在肝素注射液灌注之后30min尾靜脈注射1×106ADSCs。
　　2.提取SD大鼠原代ADSCs細(xì)胞。
　　3.研究脂肪干細(xì)胞對(duì)大鼠自體肝移植缺血再灌注損傷模型的保護(hù)作用機(jī)制
　　方法：
　　1.SD大鼠自體肝移植模型制作。
　　2.大鼠ADSCs鑒定。

4、　　3.血清ALT、AST測(cè)定大鼠肝功能。
　　4.測(cè)定氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD、MDA。
　　5.檢測(cè)線粒體活性。
　　6.HE染色觀察病理結(jié)構(gòu)。
　　7.用western blot檢測(cè)細(xì)胞ICAM-1，Bax，Bcl-2等的變化，從分子水平檢測(cè)凋亡。
　　結(jié)果：
　　1.建立了成熟SD大鼠自體肝移植模型，能良好滿足進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)要求。
　　2.提取的ADSCs高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志CD29、CD90，

5、低表達(dá)造血系標(biāo)志CD45，低表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志CD31。
　　3.與假手術(shù)組相比，IR組ALT、AST升高。與IR組相比，ADSCs組ALT、AST較低。
　　4.與假手術(shù)組相比，IR組SOD含量較低，MDA含量較高。與IR組相比，ADSCs組SOD含量較高，MDA含量較低。
　　5.與假手術(shù)組相比，IR組線粒體活性較低，與IR組相比，ADSCs組線粒體活性較強(qiáng)。
　　6.與假手術(shù)組相比，IR組肝細(xì)胞壞死，炎性細(xì)胞

6、浸潤(rùn)嚴(yán)重，與IR組相比，ADSCs組IR組肝細(xì)胞壞死，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較輕。
　　7.與假手術(shù)組相比，IR組ICAM-1、Bax高表達(dá)，Bcl-2低表達(dá)。與IR組相比ADSCs組ICAM-1、Bax表達(dá)低，Bcl-2表達(dá)高。
　　結(jié)論：
　　大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于肝臟缺血再灌注損傷有保護(hù)作用?？赡芡ㄟ^(guò)減少氧化應(yīng)激，減少線粒體損傷，降低炎癥反應(yīng)等途徑減少肝細(xì)胞壞死或凋亡。本實(shí)驗(yàn)初步探索脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于肝臟缺血再灌注損傷