大鼠嗅鞘細(xì)胞原代培養(yǎng)及其對坐骨神經(jīng)損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)的作用.pdf

1、目的： 探索一種簡便、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的成年大鼠嗅球成鞘細(xì)胞(olfactoryensh-eathingcells，OECs)的分離、培養(yǎng)及純化方法。 方法： 選取2-3月的成年SD大鼠，無菌條件下取下嗅球(olfactorybulbOB)，用眼科剪將OB剪碎，采用酶消化法和組織塊培養(yǎng)法，在含10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，利用差速貼壁法結(jié)合無血清饑餓培養(yǎng)法對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行純化，并對培養(yǎng)所得的細(xì)胞行神經(jīng)

2、生長因子受體(p75NGFR)及DAPI的免疫熒光鑒定，并計(jì)算OECs的純度。 結(jié)果： 通過酶消化法和組織塊培養(yǎng)法，結(jié)合差速貼壁法和無血清饑餓培養(yǎng)法，可獲得純度70％-80％的OECs，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，以雙極和三極細(xì)胞為主，亦有少許多極及梭形細(xì)胞，神經(jīng)生長因子受體(p75NGFR)免疫組化呈陽性。 結(jié)論： 應(yīng)用差速貼壁法與無血清饑餓培養(yǎng)法相結(jié)合進(jìn)行成年大鼠OECs原代培養(yǎng)，純化是一種簡便經(jīng)濟(jì)實(shí)用的方