嗅鞘細(xì)胞移植聯(lián)合應(yīng)用NGF治療脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的：研究聯(lián)合應(yīng)用嗅鞘細(xì)胞(OECs)和神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)移植治療脊髓損傷時(shí)脊髓運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)、神經(jīng)電生理的改善、病理形態(tài)學(xué)的改變情況以及它們之間的相互關(guān)系。以此來判斷兩者聯(lián)合應(yīng)用的效果、其是否較應(yīng)用單一因素能使脊髓功能得到更好的修復(fù),嗅鞘細(xì)胞和神經(jīng)生長(zhǎng)因子是否在修復(fù)脊髓損傷過程中產(chǎn)生協(xié)同作用及其可能的機(jī)制,為臨床上急性脊髓損傷的治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.嗅鞘細(xì)胞的原代培養(yǎng)與純化：取健康成年wistar

2、大鼠,體重200-250g,斷頸處死后迅速取出兩側(cè)嗅球,立即置于D-Hanks平衡鹽溶液中,除去嗅球被膜,然后用D-Hanks液沖洗兩遍：在手術(shù)顯微鏡下仔細(xì)分離嗅球最外兩層(嗅小球?qū)雍托嵘窠?jīng)層),將分離的組織剪成1mm見方的小塊,加入0.25%的胰蛋白酶,37℃消化20分鐘；800rpm離心5min,清洗2次,吸棄上清液后加入含10%FBS(胎牛血清fetal bovine serum FBS)的DMEM 2-3ml,終止消化；用酒精燈

3、火焰刨光的直頭滴管反復(fù)吹打組織,細(xì)胞液過100μm細(xì)胞篩；800rpm離心5min除去上清液；用DMEM稀釋細(xì)胞濃度至1x106/ml,接種于培養(yǎng)瓶,置于培養(yǎng)箱(37℃,5%CO2)內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后,將培養(yǎng)上清連同未貼壁細(xì)胞吸出,重新種植于經(jīng)多聚右旋賴氨酸處理的6孔板,加DF12培養(yǎng)液(DMEM：F12 1：1 FBS 10%青霉素100IU/L)3mL進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)1周后加入Ara-C(終濃度5-10mol/L)作用48h；清洗后