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文檔簡介
1、小反芻獸疫(PPR)，是由麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒(PPRV)感染引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病。該病是OIE規(guī)定的A類疫病，我國規(guī)定的一類動物疫病。H蛋白是PPRV的主要結(jié)構(gòu)蛋白之一，具有血凝素和神經(jīng)氨酸酶活性，可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體，是疫苗和診斷試劑研發(fā)的重要靶標。本研究制備了PPRV H蛋白的單克隆抗體，構(gòu)建了表達H蛋白的重組桿狀病毒，并通過動物實驗對其免疫原性進行了初步評價，為建立PPRV的檢測方法和新型疫苗研究奠定了
2、基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容如下:
1.PPRV H蛋白單克隆抗體的制備及鑒定
將PPRVH基因克隆至原核表達載體pGEX-KG中，通過摸索蛋白最優(yōu)表達條件獲得純化蛋白pGEX-KG-PPRV-H，將此蛋白免疫BALB/c小鼠，通過細胞融合和間接酶聯(lián)免疫吸附實驗及亞克隆技術(shù)，篩選雜交瘤細胞株，得到4株可穩(wěn)定分泌抗PPRV H蛋白的特異性單克隆抗體，分別命名為:1C4、1D8、2A1和2E1。經(jīng)鑒定，IgG亞型均為IgG1，輕鏈
3、均為Kappa鏈。通過間接免疫熒光和Western Blot分析，證實了獲得的4株單抗均具有較好的特異性。
2.PPRV H蛋白在桿狀病毒中的表達及其免疫原性初步研究
將PPRV H基因克隆至供體質(zhì)粒PfastBac HTB中，將此重組供體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DH10bac，經(jīng)PCR驗證，得到重組bacmid-PPRV-H。將重組bacmid-PPRV-H轉(zhuǎn)染sf9細胞，成功拯救出重組桿狀病毒Bacmid-PPRV-H。通過間接
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