綿羊肺腺瘤病毒囊膜基因表面蛋白的表達及其單克隆抗體的制備.pdf

1、綿羊肺腺瘤病(sheep pulmonary adenomatosis,SPA)是由β-反轉(zhuǎn)錄病毒屬，綿羊肺腺瘤病病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的一種肺腫瘤性疾病，世界動物衛(wèi)生組織將其列為B類傳染病。 為了進一步研究JSRV的致病機制及建立快速診斷SPA的方法，本研究將本室保存的重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-SU轉(zhuǎn)化E.coli BL21，經(jīng)表達純化后作為免疫原，免疫6-8周齡BALB

2、/c小鼠，運用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)將其脾細(xì)胞與SP2/O骨髓瘤細(xì)胞進行融合。運用間接ELISA方法，以純化后的pGEX-4T-1-SU重組蛋白及表達載體pGEX-4T-1標(biāo)簽蛋白GST為檢測抗原同時對雜交瘤上清進行初步篩選，得到三株針對目的蛋白的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1D6、383、3D6。 為了得到針對天然蛋白的單克隆抗體，以重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-SU為模板，克隆構(gòu)建SU基因的重組真核表達載體SU-HA-pcDNA3.1

3、(+)，并通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染使其在真核A-549細(xì)胞中得以表達，得到接近天然蛋白的真核表達蛋白。以此為檢測抗原，經(jīng)間接免疫熒光法對所得三株陽性雜交瘤細(xì)胞進行第二次檢測，結(jié)果顯示1D6、383、3D6均為陽性。因此說明本實驗最終獲得了3株能夠識別SU天然蛋白的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞，并已成功地建立了JSRV-NM株SU蛋白的具有很好的特異性及穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系。本項研究為今后建立更為靈敏的檢測SPA病原的特異性診斷方法，對SPA發(fā)