重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子βⅡ型受體基因?qū)Ω伟┥L(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、背景及目的：
　　肝細(xì)胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)惡性程度高,具有高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率,嚴(yán)重影響著其遠(yuǎn)期療效,因此需要尋找新的治療手段來有效地降低其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子βⅡ型受體(TransforminggrowthfactorbetatypeIIreceptor,TGFβRII)基因在多種腫瘤中缺失或突變,導(dǎo)致其分子表達(dá)缺失或失活與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等特征密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建能在體內(nèi)長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)

2、TGFβRⅡ的重組腺相關(guān)病毒(RecombinantAdeno-AssociatedVirus,rAAV)載體,選用人肝癌高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株MHCC97H建立裸鼠模型,觀察介導(dǎo)TGFβRⅡ基因的rAAV對(duì)肝癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生的影響,探討TGFβRⅡ基因在肝癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過程中的作用,并可能為肝癌的基因治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法：
　　1.構(gòu)建pAAV-TGFβRⅡ-IRES-ZsGreen載體,并制備介導(dǎo)TGFβRⅡ基因的rA

3、AV。
　　2.選用人肝癌高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株MHCC97H建立人肝癌裸鼠原位移植瘤轉(zhuǎn)移模型。
　　3.接種7天后,隨機(jī)將裸鼠分成3組,按每組給予相應(yīng)治療試劑不同分別標(biāo)記為PBS組、rAAV-ZsGreen組、rAAV-TGFβRⅡ-ZsGreen組,每組裸鼠通過門靜脈注入相對(duì)應(yīng)的試劑,0.2ml/只,觀察各組裸鼠生長(zhǎng)狀況。
　　4.經(jīng)治療30天后處死裸鼠提取標(biāo)本,測(cè)量各組裸鼠肝臟原位移植瘤體積,觀察腫瘤的肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移、rA

4、AV在裸鼠肝臟中的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率以及腫瘤組織的病理學(xué)變化情況;Western-blot檢測(cè)原位種植瘤組織中TGFβRⅡ蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.成功構(gòu)建了攜帶TGFβRⅡ基因的pAAV-TGFβRⅡ-IRES-ZsGreen載體,并制備滴度為3.13x1013vg/ml的高滴度rAAV。
　　2.選用MHCC97H建立的人肝癌裸鼠原位移植瘤轉(zhuǎn)移模型,各組成瘤率及PBS組腫瘤肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移率均為100％。
　　3.

5、每組裸鼠體重隨時(shí)間變化與處理方式無關(guān)(P>0.05),而每組裸鼠體重的時(shí)間效應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.rAAV-ZsGreen組及rAAV-TGFβRⅡ-ZsGreen組裸鼠肝內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光;rAAV-TGFβRⅡ-ZsGreen組裸鼠原位移植瘤的肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移率均小于PBS組、rAAV-ZsGreen組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);rAAV-TGFβRⅡ-ZsGreen組肝臟原位移植瘤體積均小于PBS組

6、、rAAV-ZsGreen組(P<0.05);rAAV-TGFβRⅡ-ZsGreen組裸鼠原位移植瘤組織中TGFβRⅡ蛋白表達(dá)水平明顯高于PBS組、rAAV-ZsGreen組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.成功構(gòu)建了攜帶TGFβRⅡ基因的rAAV載體,并制備高滴度rAAV。
　　2.rAAV介導(dǎo)TGFβRⅡ基因可在裸鼠肝內(nèi)長(zhǎng)期穩(wěn)定高效表達(dá)。
　　3.rAAV介導(dǎo)TGFβRⅡ基因?qū)Ω伟┑?/p>