河北省人感染漢坦病毒M片段基因特征研究.pdf

1、目的：探討河北省腎綜合征出血熱患者血清中漢坦病毒的基因型別，分析人感染漢坦病毒基因型的分布和變異情況，為預(yù)防和控制腎綜合征出血熱在河北省的流行提供科學(xué)依據(jù)。 方法： 1 通過流行病學(xué)調(diào)查，收集病人或疑似病人急性期血清標(biāo)本； 2 采用間接免疫熒光法篩選陽性標(biāo)本，從中提取漢坦病毒RNA； 3 通過RT-nested PCR擴(kuò)增病毒核酸，進(jìn)行基因分型； 4 選擇代表性疫區(qū)血清標(biāo)本PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純

2、化回收后進(jìn)行序列測(cè)定，根據(jù)G1和G2片段基因序列分別用DNASTAR軟件進(jìn)行同源序列比較并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹，對(duì)河北省人感染漢坦病毒的基因亞型分布、核苷酸變異及特征進(jìn)行分析。 結(jié)果： 1 2006年河北省共報(bào)告腎綜合征出血熱病例1060例，發(fā)病率為1.55/10萬，疫區(qū)在全省廣泛存在，11個(gè)地市均有發(fā)病。主要集中在河北省東北部的唐山、秦皇島，占全省發(fā)病總數(shù)的63.77％；其次為河北省中部和南部的保定、石家莊、邢臺(tái)、滄州、衡

3、水；張家口、承德、邯鄲、廊坊發(fā)病較低。體現(xiàn)了HFRS高度散發(fā)又相對(duì)集中的區(qū)域特征。 2 2006年共收集病人或疑似病人血清標(biāo)本152份，經(jīng)間接免疫熒光法(IFA)檢測(cè)陽性94份，陽性率為61.84％。 3 選取69份陽性血清標(biāo)本進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，得到17份陽性結(jié)果，陽性率為24.64％，其中≤7天的標(biāo)本35份，PCR有12份陽性，陽性率為34.29％；8.14天的標(biāo)本26份，PCR陽性5份，陽性率為19.23％；

4、≥14天有8份，PCR陽性0份。 4 對(duì)河北省漢坦病毒陽性病人血清標(biāo)本同時(shí)用SEO型和HTN型分型引物進(jìn)行RT-nested PCR擴(kuò)增，顯示17份陽性標(biāo)本所攜帶漢坦病毒均為SEO型，未發(fā)現(xiàn)HTN型。 5 選取有代表性的11份標(biāo)本進(jìn)行序列測(cè)定，分析表明其同源性較高，核苷酸變異既有轉(zhuǎn)換也有顛換。漢坦病毒G1(217-573nt)區(qū)基因變異不大，同源性高達(dá)94.4％～100％，且均與R22株的同源性接近，高達(dá)94.7％～

5、98.O％，與76-118株的同源性較低，僅為70.6％～72.0％。G2(2002-230Int)區(qū)同源性高達(dá)92.0％～100％，與R22株和76-118株的同源性分別為91.3％～97.7％和70.3％～72.7％。可見河北省人感染漢坦病毒基因變異不大，同型之間M片段的基因序列相對(duì)比較保守。 6 根據(jù)G1(217.573nt)和G2(2002-2301m)片段用DNASTAR軟件包構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。G1片段進(jìn)化樹顯示HeB

6、2、HeB/5、HeB26、HeB361 HeB45、HeB46、HeB57、HeB60、HeB82、HeB95株親緣關(guān)系較近，均屬于S3亞型：HeB7和S1亞型的L99、R22及HB55的親緣關(guān)系較近。G2片段系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示除HeB7與Sl亞型的L99、R22及HB55等親緣關(guān)系較近外，其余均與SD10、ZT10等的關(guān)系較近，同屬于S3亞型。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析未發(fā)現(xiàn)HTN型漢坦病毒的存在，此與核苷酸同源性比較的結(jié)果一致。 7 基

7、因分型及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明，河北省是典型的SEO型疫區(qū)。其基因亞型根據(jù)G1、G2片段分為S1、S3二個(gè)亞型，分型結(jié)果一致，均以S3亞型為主。在地理位置相近的地區(qū)，病毒基因組核苷酸序列同源性相對(duì)較高，系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系較近。這說明河北省人感染漢坦病毒的分布具有一定的地理區(qū)域性。 結(jié)論： 1 用RT-PCR技術(shù)直接擴(kuò)增病人早期血中漢坦病毒是可行的，可用于早期快速診斷，但需進(jìn)一步完善，提高檢出率。 2 從血清標(biāo)本直接提取