微生物轉(zhuǎn)化坎利酮的工藝研究.pdf

1、11-α-羥基-坎利酮是坎利酮羥基化反應(yīng)后形成的甾體類衍生物,也是合成依普利酮的重要藥物中間體。依普利酮作為治療高血壓和其他心血管疾病的新型藥物,具備廣闊的市場前景。微生物轉(zhuǎn)化坎利酮合成11-α-羥基-坎利酮的方法具有專一性強(qiáng)、反應(yīng)條件溫和、催化效率高、副產(chǎn)物少、成本低、污染少等優(yōu)點(diǎn)。本課題研究了應(yīng)用微生物轉(zhuǎn)化坎利酮的工藝條件。主要包括建立坎利酮和11-α-羥基-坎利酮的HPLC檢測方法、優(yōu)化了微生物轉(zhuǎn)化坎利酮的工藝條件、產(chǎn)物的分離提取

2、及其表征。主要結(jié)論如下:
　　 (1)利用高效液相色譜法,確立了底物和產(chǎn)物精確定量檢測的方法。底物和產(chǎn)物的紫外最大吸收波長確定為280nm,保留出峰時間分別是33.32min和29.05min,線性回歸方程分別Y=0.7695·10-7X-0.3428(R2=0.9910)、Y=0.8088-10-7X-0.2896(R2=0.9928),線性范圍0.1g/L～3.0g/L,底物加標(biāo)回收率為95.83%,RSD值為1.10%;底

3、物和產(chǎn)物穩(wěn)定性的RSD值分別為0.82%和1.17%,重復(fù)性的RSD值分別為0.79%和0.89%。質(zhì)譜圖中,33.32min.處峰的m/z341..4為坎利酮的加氫峰[M+H+],29.05min.處峰的m/z357.5為11-α-羥基-坎利酮的[M+H+],所對應(yīng)的分子量分別為340.1和356.5,與坎利酮(C22H28O3)和11-α-羥基-坎利酮(C22H28O4)的分子量一致。
　　 (2)以轉(zhuǎn)化率為指標(biāo),單因子實(shí)驗(yàn)

4、設(shè)計(jì)優(yōu)化了轉(zhuǎn)化條件、誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)物溶解方式、誘導(dǎo)物濃度等。采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化了培養(yǎng)基組分。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)化菌種RhizopusspUJS-0602生長最適培養(yǎng)基組分是:葡萄糖30g/L、玉米漿25g/L、酵母膏18g/L、磷酸二氫鉀1.5g/L;最適轉(zhuǎn)化條件為:轉(zhuǎn)化溫度30℃,初始pH6.5,調(diào)整孢子懸液濃度為2×107個/mL,接種量為4%,裝液量為30%,轉(zhuǎn)化時搖床轉(zhuǎn)速180rpm,轉(zhuǎn)化時間為84h,最佳底物溶媒是吐溫-80,最佳底

5、物終濃度為5.2g/L,最佳誘導(dǎo)方式為:在菌體培養(yǎng)至24h加入0.72g/L底物進(jìn)行誘導(dǎo),于36h補(bǔ)齊底物,最有利于轉(zhuǎn)化。在優(yōu)化的條件下,底物平均轉(zhuǎn)化率最高達(dá)到98.18%,比優(yōu)化前的平均轉(zhuǎn)化率提高了19.56%。
　　 (3)研究了不同提取方法和條件對提取效果的影響,結(jié)果顯示,采用有機(jī)溶劑浸提法浸泡菌絲體90min后的提取效果較好,提取率可達(dá)98.8%;通過對試驗(yàn)結(jié)果的比較,確定了利用菌株.RhizopusspUJS-0602